[发明专利]牻牛兒草中老鹤草素的分离提纯方法以及分离出的高纯老鹤草素的应用

说明书

技术领域

本发明涉及牻牛兒草中所含有有效活性成分的高纯度的分离提纯方法，以及利用该方法而得到的活性成分在功能性食品，食品原料，食品添加剂，健康食品，医药品，医药护肤品，以及化妆品等方面的应用。

背景技术

牻牛兒草学名：Geranium nepakense Sweet sunsp.Thunbergii(Sieb.et Zucc.Hara)，是一种多年生的老鹤草属的草本植物，在中国和日本都是具有代表性的药草之一，一般在山野之间野生为主，取其上半部分自然干燥之后用水煎煮可以止泻，防便秘，和清热解毒等作用，由于效果很好，在民间也一直广泛的使用。另外有文献报道其用水和酒精分离出的精制液，可以用在止汗剂，化妆品，医药护肤品等或可以跟其他草药一起共同使用。

但是，这些方法基本都是用水和酒精对牻牛兒草进行抽提，用其抽提液或抽出物跟其他草药混合使用，单独使用牻牛兒草中特定有效成分的功能的报道还没有。另外对市场上买的干燥牻牛兒草中的有效成分进行分析，发现其中含有的有效成分老鹤草素（Geraniin）是非常低的，这跟栽培方法，收割季节和干燥工序的有关系。用水或酒精抽提牻牛兒草的时候，主要有效成分老鹤草素会随着加热时间而分解成为柯里拉京（Corilagin），鞣花酸和没食子酸，而导致老鹤草素的含量大大减少。另外在对老鹤草素和其分解物以及牻牛兒草的活性研究中，发现老鹤草素是其中活性最高的。然而，至今为止还没有公开报道对牻牛兒草中真正有活性的老鹤草素的有效提纯和应用。

发明内容

本发明提供一种牻牛兒草中老鹤草素的分离提纯方法，以克服现有技术存在的上述缺陷。

本发明是通过如下的技术方案实现的：

一种牻牛兒草中老鹤草素的分离提纯方法，包括如下步骤：

将牻牛兒草在含有有机酸的水溶液或酒精水溶液或甲醇水溶液中进行提取步骤，然后采用超临界抽出法、膜处理法、透析膜处理法、再结晶法、离心分离法、合成树脂吸收法、离子交换树脂法的至少一种进行提纯步骤，得到高纯老鹤草素。

所述提纯步骤包括：

将提取液经过合成树脂法进行处理后，以10-60ml/min的速度通过活性化色谱柱后，水洗；用体积浓度为10-40％v/v乙醇，以10-60ml/min的速度洗脱后回收；得到的溶析液使用逆渗透膜进行膜处理，真空浓缩；用10-50%v/v乙醇，在1-15℃下通过结晶法进行精制，结晶物回收后，再次用40-80%v/v乙醇进行溶解，得到的溶解液通过真空浓缩干固，得到高纯老鹤草素。

所述活性化色谱柱最好是HP-20型号的色谱柱，并且用质量浓度4-10%NaOH水溶液以10-60ml/min的速度通液后水洗。然后，用质量浓度4-10%H₂SO4水溶液以10-60ml/min的速度通液后水洗；

所述逆渗透膜优选膜面积0.6-1.2m²，NaCl阻止率55-80%；

所述膜处理优选在循环压力8-15kg/cm²，循环流量5-10L/min的条件下进行；

所述高纯老鹤草素中老鹤草素质量含量为50-99.9%；

所述有机酸可以是一元酸、二元酸或多元酸，如醋酸，酒石酸，苹果酸，琥珀酸等，优先多元酸，最好是柠檬酸；

所述牻牛兒草可以是干燥或者未干燥的，并且最好选择叶子部分，因为研究发现该部位中老鹤草素含量最高。

牻牛兒草可采用野生，也可以栽培，最好是采用如下方法栽培：

环境温度控制在10-20度左右，把牻牛兒草的种子播种到定植用的容器中，定植4周后长成的5-8公分的幼苗移植到铺有塑料薄膜的地里，按每列5-8株，株间15-25公分定植，取定植10-12周后的牻牛兒草。

采用上述方法栽培的牻牛兒草在定植10-12周后收割为最佳，其叶子中含有的有效成分最高。

本发明可把牻牛兒草中的有效成分老鹤草素在不被分解的情况下的提取出来，方法简单易行，效率高。

本发明还公开了上述方法制备的高纯老鹤草素的应用，研究发现，本发明得到的高纯老鹤草素可阻碍黑色素生成，因此可作为美白化妆品添加剂，起到美白效果；其还具有优异的抗氧化效果，因此可作为功能性食品、保健食品、医药品、准药品中的添加剂；高纯老鹤草素还具有抑制碱性磷酸酶（ALP）活性的效果，从而可应用于消除狐臭、体臭的腋下除臭剂。

具体实施方式

下面结合附图给出本发明较佳实施例，以详细说明本发明的技术方案。

实施例1