[发明专利]一种检测TEL-AML1融合基因mRNA表达量的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域的荧光定量PCR技术，特别涉及一种检测TEL-AML1融合基因mRNA表达量的试剂盒。

背景技术

TEL-AML1融合基因是儿童白血病常见的融合基因，由其所致的白血病占儿童急性淋巴细胞白血病（Acute lymphoblastic leukemia，ALL）20%~25%，由t(12;21)(p13;q22)形成，即位于12号染色体上的TEL（Translocation Ets Leukemia）螺旋-环-螺旋区域融合到位于21号染色体上AML1（Acute Myeloid Leukemia 1）的DNA结合和激活区域而成。其见于12-28％的B系ALL，但仅见于B前体细胞ALL（BCP-ALL），未见于成熟B-ALL及T-ALL。TEL-AML1融合基因在成人中的检出率只有2%~4%，儿童ALL多发生在1~10岁，其中1~5岁患者占76.2%。

TEL基因易位导致其下游的CD-KNIB基因不能编码周期素依赖激酶抑制蛋白P27，细胞从G1期进入S期，增殖能力增加，白血病细胞过度生长。异常的TEL-AML1融合蛋白也可通过Runt同源结构域与野生型AML1竞争DNA结合位点而与核心增强序列结合，活化组蛋白去乙酰化酶，从而使AML1由转录激活因子转化为转录抑制因子，显著负性抑制野生型AML1功能，抑制转录过程，导致AML1调节靶基因（M-CSF受体、IL-3和GM-CSF受体基因等）的表达受阻，影响造血干细胞的自我更新和分化能力。

检测TEL-AML1融合基因的mRNA表达可以检测白血病细胞的微小残留，TEL-AML1融合基因的mRNA表达快速降低至消失提示无残留白血病细胞，而TEL-AML1融合基因的mRNA表达呈现缓慢下降的趋势预示ALL复发。因此，TEL-AML1融合基因表达的检测对预测儿童急性淋巴细胞性白血病的预后以及危险分层具有指导意义。实时荧光定量PCR（Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应）技术实现了PCR从定性到真正意义的定量的飞跃，为人类疾病基因的定量检测提供了一个行之有效的检测工具，与普通PCR相比具有特异性增强、灵敏度提高和检测快速、降低了污染等特点，但目前尚未有实时荧光定量PCR方法检测急性淋巴细胞白血病中TEL-AML1融合基因的相关报道。

发明内容

为了解决上述技术空缺的问题，本发明实施例提供了一种检测TEL-AML1融合基因mRNA表达量的试剂盒，所述技术方案如下：

本发明实施例提供了一种检测TEL-AML1融合基因mRNA表达量的试剂盒，包括检测用引物、荧光探针、cDNA第一链合成试剂、荧光定量PCR混合液、阴性对照和阳性对照，所述检测用引物、荧光探针包括TEL-AML1融合基因引物、内参基因ABL引物及Taqman荧光探针，其中：

TEL-AML1融合基因上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:1所示；

TEL-AML1融合基因下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:2所示；

TEL-AML1融合基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:3所示；

ABL基因上游引物序列如序列表中SEQ ID NO:4所示；

ABL基因下游引物序列如序列表中SEQ ID NO:5所示；

ABL基因Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:6所示；

所述cDNA第一链合成试剂含有MgC1₂、逆转录酶缓冲液、dNTPs、RNA酶抑制剂、Oligo(dT)₁₅、AMV逆转录酶和无RNase去离子水；所述荧光定量PCR混合液含有PCR预混合液、Mg²⁺、dNTPs、dUTP、Taq酶、UNG酶和无RNase去离子水。

进一步地，所述试剂盒还包括内部阳性控制序列、内部阳性控制序列的引物和Taqman荧光探针，其中：内部阳性控制序列如序列表中SEQ ID NO:7所示；内部阳性控制序列的上游引物如序列表中SEQ ID NO:8所示；内部阳性控制序列的下游引物如序列表中SEQ ID NO:9所示；内部阳性控制序列的Taqman荧光探针如序列表中SEQ ID NO:10所示。