[发明专利]一种金线莲的组培繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养方法，尤其是涉及一种金线莲的组培快速繁殖方法。

背景技术

由于金线莲具备显著的药用功效，具有清热、凉血、降血压、抗菌、抗癌等功效，因此金线莲的药用价值已被世人所认可，并被广泛地使用。但是金线莲在自然条件下繁殖率低、生长速度很慢，加之自然条件的恶化和人类行为破坏，已导致其濒临灭绝，致使金线莲供不应求。

为满足市场的需求，金线莲的人工繁殖及培养技术被大量研究及应用。在种子繁殖、扦插繁殖和组培繁殖中，组培繁殖是最适合金线莲人工培育的繁殖方法，组培繁殖技术是实现金线莲规模化、产业化培育和生产的最优技术。

中国专利CN102090341A公开一种金线莲的快繁方法，包括种苗消毒、芽诱导、芽增殖、幼苗培养、根诱导、试管苗移栽，所述芽增殖的培养基为：去除肌醇的MS+ZnSO4·7H2O6mg/L+KH2PO4180mg/L+6-BA4mg/L+NAA1mg/L+2%蔗糖。

中国专利CN102100171A公开一种金线莲水培方法，该方法将金线莲种苗清洗消毒后，移植到培养盘中，置于装有水培营养液的培养槽内培育，每10L水培营养液中含有：四水硝酸钙650~800mg，硝酸铵50~60mg，硝酸钾280~350mg，磷酸二氢钾100~130mg，硫酸镁350~380mg，碘化钾0.5~0.8mg，硫酸锰2~5mg，钼酸钠0.2~0.3mg，氯化钴0.1~0.2mg，硼酸2~4mg，硫酸锌0.5~1mg，硫酸铜0.3~0.5mg，铁盐溶液3~5ml；铁盐溶液是由水、七水硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠配制而成。

发明内容

本发明的目的在于提供能够快速促进金线莲茎段的快速繁殖并生长的一种金线莲的组培繁殖方法。

本发明包括以下步骤：

1）取金线莲的茎段作为外植体材料，将外植体消毒；

2）茎段不定芽的诱导；

3）组培苗的培育；

4）组培苗移栽。

在步骤1）中，所述金线莲最好选用野生金线莲；所述外植体为除去金线莲叶片后的野生金线莲茎段；所述外植体消毒的具体方法可为：

（1）将外植体置于流动水中冲洗；所述冲洗的时间可为1～3h。

（2）对冲洗后的外植体浸润灭菌；所述灭菌可在水平超净工作台内完成，外植体放置于已消毒的容器中并用酒精浸泡，所述浸泡的时间可为10～30s。

（3）将步骤（2）浸润灭菌后的外植体放入HgCl溶液灭菌，所述HgCl溶液的质量分数可为0.1%，所述灭菌的时间可为5～20min。

（4）将步骤（3）处理后的外植体用无菌水进行涮洗，所述涮洗的条件可为涮洗5～10次，每次涮洗的时间可为1～5min。

在步骤2）中，所述茎段不定芽的诱导方法可为：将已消毒的外植体茎段切成3段，分别接种于MS培养基上，茎段不定芽诱导后，转接到增殖培养基，培养后得到组培苗；

所述切成3段可切成上段、中段和下段，所述上段切除茎尖，所述上段、中段和下段的长度可分别为0.5～1.0cm，所述上段、中段和下段最好每段均带有1～2个节间；所述培养的时间可为2～4个月；所述增殖培养基的组分为：MS培养基+细胞分裂素（6-苄氨基腺嘌呤,6-BA）0.1～0.5mg/L+激动素（6-糖基氨基嘌呤,KT）0.1～0.5mg/L+生长素（a-萘乙酸,NAA）0.1～0.5mg/L+吲哚丁酸(IBA)0.1～0.5mg/L+水解酪蛋白(CH)0.3～0.5g/L+香蕉50～80g/L+活性碳0.5～1.5g/L+蔗糖25～40g/L+琼脂6.5～8g/L；增殖培养基的pH可为：5.8～6。

在步骤3）中，所述组培苗的培育方法可为：将组培苗接种于生根培养基上，经过培育得到生根组培金线莲苗，培育的环境条件为：温度(24±2）℃，光照时间11h/d，光照强度900～2000lux，培育时间为2～3个月；所述生根培养基的组分为：1/2MS培养基+细胞分裂素（6-苄氨基腺嘌呤,6-BA）0.1～0.5mg/L+激动素（6-糖基氨基嘌呤,KT）0.1～0.5mg/L+生长素（a-萘乙酸,NAA）0.1～0.5mg/L+水解酪蛋白(CH)0.3~0.5g/L+香蕉100～120g/L+活性碳1～1.5g/L+蔗糖15～30g/L+琼脂6.5～8g/L；生根培养基的pH可为：5.8～6。

在步骤4）中，所述组培苗移栽方法可为：将生根组培金线莲苗移栽大棚，大棚的基质按质量比的原料组成为：泥炭土∶菜园土∶蛭石=2∶1∶1。