[发明专利]一种文昌鱼细胞内信号传导蛋白及其表达基因与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种文昌鱼细胞内信号传导蛋白及其表达基因与应用，特别是一种海洋模式生物文昌鱼细胞内信号传导蛋白BbtSmad6/7及其表达基因与应用，属于基因工程技术领域。

背景技术

转化生长因子家族（Transforming Growth Factor-beta，TGFβ）参与细胞分裂、分化、迁移、附着、死亡和免疫应答等细胞活动。TGF-β通过与特异受体结合行使生理功能。TGF-β配体-受体的相互作用及下游的信号转导路径被广泛研究。最经典的信号通路模式是，TGF-β与活化的TGFR-II结合，促进TGFR-I的富集和磷酸化。活化的TGFR-I通过在细胞内磷酸化R-Smad（receptor-activated members of the Smad）起始信号转导。激活的R-Smad与Smad4相互作用并与转录辅助因子一起转移到细胞核内，异构复合物调控靶基因的表达。I-Smad（inhibitory Smad），如Smad6或Smad7，阻止R-Smad磷酸化和R-Smad/Smad4异构复合物向细胞核的转移，从而负调控TGF-β的诱导效应。在细胞核内，Smad复合物解体，磷酸化的R-Smad通过核磷酸酶（如PPM1A/PP2C）解磷酸化，使Smad游离并运往细胞质。只要活性受体存在，这种循环就一直延续。有目的地调控和干预Smad信号转导途径，有助于促进对创伤愈合与胚胎发育的理解，加深对肿瘤发生、发展的认识等。

Smad家族成员有3种：受体活化型或通路限制型Smad（R-Smad)，共同通路型Smad（Co-Smads)和抑制型Smad（I-Smads）。I-Smad（inhibitory Smad），如Smad6或Smad7，阻止R-Smad磷酸化和后续的R-Smad/Smad4异构复合物的核定位。I-Smad的诱导表达对TGF-β信号传导进行负反馈调控。I-Smad含有C端MH2结构域缺少MH1结构域。Smad6通过打破Smad1与Co-Smad间的联系阻抑BMP信号通路并形成无活的Smad1/Smad6复合物。另外，Smad7通过结合TGF-β、activin和BMP type I receptor阻止R-Smad磷酸化。靶基因转录后Smad复合物从染色质上被释放并经历泛素化（ubiquitination）。

我们对文昌鱼中的I-Smad基因进行了分离，并将其命名为Bbsmad6/7，并发现细菌冲击后BbSmad6/7基因转录发生上调，这说明TGFβ-SMAD信号通路很可能参与了免疫应答。

文昌鱼既具有脊椎动物的基本特征，又具有许多无脊椎动物的特征。深入开展文昌鱼免疫系统的研究不仅有助于阐明脊椎动物和人类免疫性的起源和进化，更可以与其它海洋生物进行纵向比较，帮助我们找到海洋生物特异的防御机制，认识和阐明海水养殖动物免疫防御机制对病原感染应答的规律，为海水养殖动物的病害控制提供新思路，为病害的免疫防治技术提供理论依据。从而为我国海水养殖业的健康、持续发展提供有力的保障和促进。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供一种文昌鱼细胞内信号传导蛋白及其表达基因与应用。

术语说明

1.PCR技术：链式聚合酶反应，利用DNA聚合酶，模板，引物以及dNTP进行体外扩增特定DNA片段的技术。

2.CDD析软件：NCBI网站上提供的一种用来推测和分析特定氨基酸序列形成的结构域信息的软件。

本发明技术方案如下：

一种海洋模式生物文昌鱼细胞内信号传导蛋白BbSmad6/7的表达基因，核苷酸序列如SEQID No.1所示。

一种海洋模式生物文昌鱼细胞内信号传导蛋白BbSmad6/7，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

一种重组载体，插入了SEQ ID NO.1所示核苷酸序列。该重组载体由pEASY-T3载体插入SEQ ID NO.1所示核苷酸序列获得，该表达载体购自德国Novagen公司。

一种重组大肠杆菌，转入了上述SEQ ID No.1所示核苷酸序列或上述重组载体。

上述文昌鱼细胞内信号传导蛋白BbSmad6/7的表达基因、重组载体或重组大肠杆菌在制备海水养殖免疫防治药物中的应用。

有益效果