[发明专利]呕吐毒素免疫亲和柱的制备方法

权利要求书

1.一种呕吐毒素免疫亲和柱的制备，其特征在于，是由固相载体和预期偶联的呕呕吐毒素单克隆抗体组成，具体步骤为：

  （1）偶联：取纯化后的呕吐毒素单克隆抗体与溶胀后的CNBr-Sepharose 4B凝胶共同放置于偶联缓冲液中，室温下震荡偶联；

  （2）封闭：在偶联凝胶产物中加入其5～10倍体积的封闭缓冲液，室温下震荡反应2h；

  （3）洗涤：分别用5～10倍封闭后凝胶体积的醋酸盐缓冲液和Tris-HCL缓冲液交替洗涤3次，然后用5～10倍封闭后凝胶体积的PBS缓冲液洗涤2次，制备得到免疫亲和吸附剂；

  （4）装柱：将得到的免疫亲和吸附剂填充到固相萃取柱中，加入PBS缓冲液后自然沉降，得到呕吐毒素免疫亲和柱，4度保存待用。

2.根据权利要求1所述的呕吐毒素免疫亲和柱的制备方法，其特征在于所述的固相载体为CNBr-Sepharose 4B。

3.根据权利要求1所述的呕吐毒素免疫亲和柱的制备方法，其特征在于所述的呕吐毒素单克隆抗体与CNBr-Sepharose 4B干粉的质量比为1：80；所述的偶联缓冲液为0.1 mol/L NaHCO3溶液；溶解CNBr-Sepharose 4B干粉的缓冲液为1.0 mmol/L HCL。

4.根据权利要求1所述的呕吐毒素免疫亲和柱的制备方法，其特征在于所述的封闭缓冲液为0.1 mol/L Tris-HCL（pH 8.0），以封闭未偶联的活化位点。

5.根据权利要求1所述的呕吐毒素免疫亲和柱的制备方法，其特征在于其中步骤（3）中所述的醋酸盐缓冲液为0.1 mol/L、pH4.0的醋酸盐缓冲液；所述Tris-HCL缓冲液为0.1 mol/L、pH8.0 的Tris-HCL缓冲液。

6.呕吐毒素免疫亲和柱可用于谷物及谷物制品检测呕吐毒素残留的前处理方法。