[发明专利]一种用于检测赭曲霉毒素的ELISA试剂盒的制备

说明书

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体地涉及一种用于定量检测谷物和谷物产品中的赭曲霉毒素残留量的ELISA试剂盒。

背景技术

真菌毒素（Mycotoxin）是由真菌产生的有毒次级代谢产物，是粮食和饲料的重要污染物。真菌毒素广泛污染各种农作物主要由产毒真菌的大量繁殖和全球经济贸易一体化共同促成。高温高湿的气候条件、简陋的收割方式、不适宜的存储和运输条件是导致真菌大量繁殖并产生大量真菌毒素的重要原因。根据联合国粮食及农业组织（FAO），全球粮食作物的25%被真菌毒素污染。现今报道的真菌毒素有300多种,其中常见的有赭曲霉毒素A（OchratoxinA，OTA），赭曲霉毒素（vomotoxin，VT）又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇（Deoxynibaleno，DON），黄曲霉毒素B1 （Aflatoxin Bl，AFB1），伏马菌素B1（Fumonin Bl, FB1），玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN），杂色曲霉毒素（Sterigmatocystin，ST）等。真菌毒素可以引起动物的急、慢性中毒，或导致动物情绪狂躁、生长受限、繁殖率下降或产生激素样作用等。人类因食入一次污染的谷物或者二次污染的动物源性食品（奶、肉、蛋）而受到毒素污染的威胁。真菌毒素给人类的生产生活带来严重的经济损失和健康威害。

赭曲霉毒素（Ochratoxins）是由曲霉属（Asperillus）和青霉属（Penicillium）菌株产生的次级代谢产物，主要包括赭曲霉毒素A（OchratoxinA,OTA）、赭曲霉毒素B和赭曲霉毒素C等7种结构类似的化合物，其中OTA的毒性最强，引起人们的广泛重视。赭曲霉毒素A的分子量为403.，化学式结构式C₂₀H₁₈CINO₆，易溶于有机溶剂，如乙醇和二甲基亚砜，微溶于水，物理化学性质稳定，耐热，一般的烹调和加工方法对其只有部分破坏作用。

赭曲霉毒素的毒理作用机制主要包括抑制 ATP 的生成，与苯丙氨酸竞争苯丙氨酸-tRNA 结合位点从而抑制蛋白质的合成，促进细胞膜脂的过氧化。OTA的毒性主要表现为肝毒性、肾毒性、遗传毒性、神经毒性、致畸性、致癌性和免疫毒性。OTA毒性作用的主要靶器官是肾脏和肝脏，可诱发肿瘤。在一些欧洲国家，OTA被认为与巴尔干地区性肾病有关，尤其是保加利亚，罗马尼亚，塞尔维亚等。OTA被世界癌症研究(International Agency for Researeh on Ceancer，IARC)会列为2B类物质，即可能的人类致癌物。

鉴于OTA的广泛污染和剧烈毒性，许多国家推荐或规定OTA的检测方法和限量的法规和条款，其中欧盟制定的残留限量包括谷物原料5ng/g，谷物加工品3 ng/g，葡萄干10 ng/g，速溶咖啡10 ng/g，葡萄酒2 ng/g。2006年我国制定了饲料中OTA的限量标准，规定饲料中OTA限量标准为100μg/kg，应用的测试方法是TLC，随着OTA检测的需求越来越高，TLC受方法本身限制，灵敏度低，操作耗时，已经不能完全满足OTA检测工作的需求。理化分析方法需要昂贵的检测设备、专业的操作人员，以及复杂的样本前处理方法，限制了该方法的广泛应用。随着基于抗原抗体的特异性结合的免疫学检测技术和超微量分析方法的日益发展，能够满足OTA检测的需求，近年来在毒素残留的检测中得到广泛的应用。目前赭曲霉毒素的免疫学检测试剂盒大多来自进口，而国内有关赭曲霉毒素的试剂盒的开发还相对落后。本发明旨在建立一种检测赭曲霉毒素的ELISA试剂盒的制备。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种用于检测赭曲霉毒素的ELISA试剂盒，其检测灵敏、准确、快速，操作简便、特异性强，适用于大批样品的检测。本发明提供了一种用于检测赭曲霉毒素的ELISA试剂盒的制备。

检测赭曲霉毒素的ELISA试剂盒的制备及检测方法，包括酶标板、赭曲霉毒素标准品、酶标赭曲霉毒素工作液、底物液A、底物液B、终止液和浓缩洗涤液。

一种用于检测赭曲霉毒素的ELISA试剂盒的制备，包括以下步骤：酶标板的制备、赭曲霉毒素标准品的制作、酶标赭曲霉毒素工作液的制备、洗涤液的制备、底物液A的制备、底物液B的制备、终止液的制备。