[发明专利]用于检测呕吐毒素的ELISA试剂盒的制备

说明书

技术领域

本发明属于检测技术领域，具体地涉及一种用于定量检测谷物和谷物产品中的呕吐毒素残留量的ELISA试剂盒。

背景技术

真菌毒素是真菌产生的次级代谢产物，目前己知的有300多种化学结构不同的真菌毒素，其中有30多种真菌菌株产生的代谢产物对动物和人类都具有致病性。根据FAO估计，每年全世界约有25%的粮食作物受到真菌毒素的污染，造成的经济损失每年达数千亿美元。在人类日益关注食品卫生质量和安全的今天，真菌毒素的污染已成为不容忽视的问题。我国农产品和饲料中常见的、危害性比较大的真菌毒素主要有黄曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌炼醇、呕吐菌素、玉米赤霉烯酮及赭曲霉毒素A等。

呕吐毒素，又称脱氧雪腐镰刀菌炼醇（Deoxynivalenol， DON），是于1970年从被禾谷镰刀菌污染的玉米中分离出来的一种能引起呕吐的毒素，主要由禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）、黄色镰刀菌（Fusarium culmorum）和燕麦镰刀菌（Fusarium avenaceum）产生，常见于赤霉病麦。我国是小麦赤霉病高发区，赤霉病流行时，长江中下游地区、东北春麦区和黄淮小麦的病穗率高达50%以上。呕吐毒素的化学名称为3a,7a,15-三羟基草镰孢菌-9-唏-8-酮，分子量296.3，属单端孢霉炼族化合物B型。对热比较稳定，一般的烹调和加热都不能破坏其毒性，对碱性环境比较敏感，用碳酸钠溶液洗涤粮食，可以除掉70%左右的DON。

DON对小麦黄化芽鞘和培根的生长有强生物活性，特别是对感病小麦有显著的生长抑制作用，并损伤寄主组织细胞，导致芽鞘、胚根变色溃烂。DON可直接污染谷类等农作物，从而进入人或动物体内，还可通过被污染的肉、奶等动物源性食品进入人体。动物DON中毒后表现为呕吐，食欲减退，体重下降，流产，弱仔和死胎，死亡率增高。人类DON中毒后会出现恶心、呕吐、胃部不适、腹痛、腹泻、头痛、头暈，还可能有口干、全身无力的症状，少数患者会出现颜面潮红、发烧。DON还具有很强的致癌、致畸、致突变的毒性、免疫毒性等危害，已被联合国粮农组织(FAO)和世界卫生组织(WHO)确定为最危险的自然发生食品污染物之一。1998年，在国际癌症研究机构公布的评价报告中，呕吐毒素被列为三类致癌物。

呕吐毒素的危害已引起很多国家的重视，一些国家已制定了谷物中呕吐毒素的限量标准，美国制定供人类食用的小麦呕吐毒素允许限量≤2 mg/kg，而欧盟制定的限量标准相对较严，谷粉及玉米粉中允许限量≤0.75 mg/kg。我国GB 2715-2005《粮食卫生标准》中规定小麦、大麦、玉米及其成品粮中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的限量为1000μg/kg，GB 2761-2005《食品中真菌毒素限量》规定小麦和玉米的脱氧雪腐镰刀菌烯醇的限量为1000μg/kg。

自60年代以来，所建立的呕吐毒素的检测方法多达30余种，主要分为三类：生物学方法、理化方法以及免疫分析方法。生物学方法的检测方法极易受到干扰，现已较少使用。基于大型精密仪器的理化方法具有灵敏度高、特异性强的优点，但其需要昂贵的检测设备、专业的操作人员，以及复杂的样本前处理方法，限制了该方法的广泛应用。免疫分析方法兴起于上世纪80年代，基于抗原抗体的特异性结合，具有灵敏、快速、特异、简便等优点，近年来已广泛应用到毒素残留的检测中。目前呕吐毒素的免疫学检测试剂盒大多来自进口，而国内有关呕吐毒素的试剂盒的开发还相对落后。本发明旨在建立一种检测呕吐毒素的ELISA试剂盒的制备。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种用于检测呕吐毒素的ELISA试剂盒，其检测灵敏、准确、快速，操作简便、特异性强，适用于大批样品的检测。本发明提供了一种用于检测呕吐毒素的ELISA试剂盒的制备。

检测呕吐毒素的ELISA试剂盒的制备及检测方法，包括酶标板、呕吐毒素标准品、呕吐毒素抗体工作液、酶标二抗工作液、底物液A、底物液B、终止液和浓缩洗涤液。

一种用于检测呕吐毒素的ELISA试剂盒的制备，包括以下步骤：酶标板的制备、呕吐毒素标准品的制作、呕吐毒素单克隆抗体及其工作液的制备、酶标二抗工作液的制备、洗涤液的制备、底物液A的制备、底物液B的制备、终止液的制备。