[发明专利]用于鉴定小麦春化基因VRN-A1和VRN-B1的PCR体系

权利要求书

1.用于鉴定或辅助鉴定待测小麦春化基因的多重PCR引物对组，所述小麦春化基因为VRN-A1基因和VRN-B1基因，其特征在于：所述多重PCR引物对组由引物对组A和引物对组B组成；所述引物对组A由特异于所述VRN-A1基因的两个引物对组成；所述引物对组B由特异于所述VRN-B1基因的两个引物对组成；

所述引物对组A中，所述特异于VRN-A1基因的两个引物对分别为序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成的引物对1，以及序列3和序列4所示的两条单链DNA组成的引物对2；

所述引物对组B中，所述特异于VRN-B1基因的两个引物对分别为序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成的引物对3，以及序列5和序列7所示的两条单链DNA组成的引物对4。

2.根据权利要求1所述的引物对组，其特征在于：所述引物对组A中，所述序列1、所述序列2、所述序列3和所述序列4共四条单链DNA在PCR反应体系中的摩尔比为1~1.5：1~1.5：1~1.5：1~1.5；所述引物对组B中，所述序列5、所述序列6和所述序列7共三条单链DNA在PCR反应体系中的摩尔比为2~2.5：1~1.5：2~2.5。

3.根据权利要求2所述的引物对组，其特征在于：所述引物对组A中，所述序列1、所述序列2、所述序列3和所述序列4共四条单链DNA在PCR反应体系中的摩尔比为1：1：1：1；所述引物对组B中，所述序列5、所述序列6和所述序列7共三条单链DNA在PCR反应体系中的摩尔比为2：1：2。

4.含有权利要求1-3中任一所述引物对组的试剂盒。

5.权利要求1-3中任一所述引物对组的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括将权利要求1-3中任一所述引物对组中各序列所示单链DNA分别单独包装的步骤。

6.权利要求4所述PCR试剂盒的制备方法，包括如下步骤：将权利要求1-3中任一所述的引物对组中各序列所示单链DNA分别单独包装后，与下述物质中的至少一种包装在同一试剂盒内：PCR反应缓冲液、DNA聚合酶和4种dNTP。

7.鉴定或辅助鉴定待测小麦含有Vrn-A1a、Vrn-A1b、Vrn-A1c和vrn-A1这四种基因中哪一种，以及含有Vrn-B1和vrn-B1这两种基因中哪一种的方法，包括如下（1）和（2）的步骤：

所述（1）为如下b1）和b2）：

b1）以待测小麦的基因组DNA为模板，用权利要求1-3中任一所述引物对组中的所述引物对组A进行PCR反应，所述PCR反应的退火温度为60℃；

b2）以待测小麦的基因组DNA为模板，用权利要求1-3中任一所述引物对组中所述引物对组B进行PCR反应，所述PCR反应的退火温度为65℃；

（2）检测步骤（1）得到的PCR产物的大小，按照如下方法根据PCR产物确定所述待测小麦含有Vrn-A1a、Vrn-A1b、Vrn-A1c和vrn-A1这四种基因中哪一种，以及含有Vrn-B1和vrn-B1这两种基因中哪一种：

以所述引物对组A进行PCR反应，若所述PCR产物中同时含有715bp和624bp的两个DNA片段，则所述待测小麦含有或候选含有Vrn-A1a基因；若所述PCR产物中含有473bp的DNA片段，则所述待测小麦含有或候选含有Vrn-A1b基因；若所述PCR产物中含有493bp的DNA片段、同时不含有1068bp的DNA片段，则所述待测小麦含有或候选含有Vrn-A1c基因；若所述PCR产物中同时含有493bp和1068bp的两个DNA片段，则所述待测小麦含有或候选含有vrn-A1基因；

以所述引物对组B进行PCR反应，若所述PCR产物中含有709bp的DNA片段，则所述待测小麦含有或候选含有Vrn-B1基因；若所述PCR产物中含有1149bp的DNA片段，则所述待测小麦含有或候选含有vrn-B1基因。

8.一种培育半冬性小麦品种的方法，包括采用通过权利要求7的方法鉴定得到的同时含有或候选含有vrn-A1基因和Vrn-B1基因的小麦作为亲本进行育种的步骤。

9.一种培育春性小麦品种的方法，包括采用通过权利要求7的方法鉴定得到的含有Vrn-A1a基因、Vrn-A1b基因和Vrn-A1c基因中至少一种的小麦作为亲本进行育种的步骤。