[发明专利]串珠镰刀菌素酶联免疫检测试剂盒

权利要求书

1.串珠镰刀菌素酶联免疫检测试剂盒的制备，包括洗涤液，显色液，终止液；其特征在于：包有串珠镰刀菌素固相抗原的包被板、串珠镰刀菌素标准品，串珠镰刀菌素单克隆抗体、串珠镰刀菌素酶标二抗。

2.串珠镰刀菌素固相抗原的包被板制作，包括包被原的制作、封闭液的配置、以及孵育；把包被原加入包被液用作固相抗原的包板制作；包被液：称取1.6 g碳酸钠加上2.9 g碳酸氢钠，加双蒸水至1000 mL，调节pH至9.6；封闭液：称取1 g BSA，加到100 mL PBS缓冲液中；包板时每孔100 μL包板液，37℃下孵育2 h，后取出洗板两次，加封闭液，每孔180 μL，37℃下孵育1.5 h，取出甩干，加干燥剂2 - 8℃保存。

3.根据权利要求书第一条所述，串珠镰刀菌素的标准品由高标稀释而成，稀释液为PBS缓冲液；0.1M PBS：1000 mL蒸馏水中加 NaCl 9g，Na₂HPO₄·12H₂O 6g ，NaH₂PO₄·2H₂O 0.4g， PH：7.2。

4.根据权利要求书第一条所述，串珠镰刀菌素的酶标二抗的酶由辣根过氧化酶标记。

5.根据权利要求书所述，串珠镰刀菌素的检测步骤如下：取包被板，加入标准品/样本50 μl到对应的微孔中，再加入酶标记物50 μL/孔，然后再加入50μL/孔抗体工作液，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光反应30 min；小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，加洗涤液 250 μL /孔，每次浸泡15～30 s，充分洗涤4～5次，用吸水纸拍干；加入显色A，B液50 μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境反应15 min；每孔各加50 μL终止液，设定酶标仪在450 nm处，测定OD值（建议用450/630 nm双波长检测，在5 min内读完数据）；从标准曲线中计算样品中串珠镰刀菌素的含量。