[发明专利]一种恩拉霉素粗品的制备方法

说明书

 

技术领域    本发明属于分离技术领域，涉及一种纯化恩拉霉素粗品的方法。

背景技术    恩拉霉素(enramycin) 又名恩来霉素、恩霉素、安来霉素、持久霉素，是由放线菌(Streptomyces fungicidicus)发酵而得，是不饱和脂肪酸与十几种氨基酸结合的多肽类抗生素，是其盐酸盐形式应用。对革兰氏阳性菌有显著抑菌作用，主要阻碍细菌细胞壁的合成。敏感细菌有金黄葡萄球菌、表皮葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、酿脓链球菌等。而肺炎球菌、枯草杆菌、炭疽杆菌、破伤风梭菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌亦较敏感。白色或微黄白色粉末 (粗品呈灰色或灰褐色的粉末，有特臭)。234～238℃分解，易溶于稀盐酸、微溶于水、甲醇、乙醇，不溶于丙酮。

恩拉霉素对革兰氏阳性菌有很强的活性，特别是对肠内的有害梭状芽孢杆菌(Clostridium)抑制力很强。长期使用后不容易产生抗药性，因它改变了肠道内的细菌群，所以对饲料中营养成分的利用效果好，可以促进猪、鸡增重和提高饲料转化率。

为了避免由于抗生素的滥用引起耐药菌株大量繁殖或使药物在畜产品中的残留量增大，对畜禽生长及人体健康造成直接危害，应用畜禽专用的抗生素饲料添加剂已迫在眉睫。由于恩拉霉素具有优良的促生长和改善饲料利用率的作用，恩拉霉素内服极不易被吸收，药物主要通过粪便排出体外。因此被世界上许多国家推荐作为抗生素促生长剂。市场上主要的应用形式将产生恩拉霉素的发酵液直接离心或压滤形成菌丝体，再将菌丝体混合入饲料中。这种方法虽然省去了提纯的步骤，但是会造成恩拉霉素效价低，用量大的问题，不利于动物饲料的精细化制备和控制。因此，需要一种能够低成本且高效率制备含有较高恩拉霉素效价的粗品的方法。

中国发明专利申请200910032340.1《一种安来霉素产生菌及利用大孔树脂提取的方法》中记载用大孔吸附树脂安伯莱特XAD-4、安伯莱特XAD-16 等来分离提取恩来霉素。中国发明专利申请201010213986.2《使用大孔弱酸性阳离子树脂分离提取恩拉霉素的方法》中使用了大孔弱酸性阳离子树脂分离提取恩拉霉素。以上发明中公开的方法都利用了层析柱，由于层析柱的体积、挂载能力以及流量的限制，均无法实现恩拉霉素粗品的大规模连续的提纯。

发明内容   本发明的目的是提供一种恩拉霉素粗品的制备方法，其包括如下步骤：步骤1，取产生恩拉霉素的链霉菌发酵液，用盐酸溶液将发酵液调整至pH值为3.0-5.0；步骤2，向发酵液中加入与发酵液等体积的极性有机溶剂，搅拌并浸泡1-3h，得浸出液；所述的极性有机溶剂为甲醇、乙醇或丙酮的一种或几种,甲醇、乙醇或丙酮的质量分数为90%-100%；其中，优选95%的乙醇；步骤3，对步骤2处理得到的浸出液进行固液分离出滤液和滤渣，收集滤液；步骤4，向步骤3中获得的滤液中加入1-3倍滤液体积的纯水，通过聚醚砜超滤膜，截留分子量为30KD，收集超滤膜滤出液；步骤5，将步骤4中的膜滤出液通过截留分子量为5KD的聚醚砜纳滤膜或聚酰胺纳滤膜，收集该一次纳滤膜滤出液；步骤6，将一次纳滤膜滤出液通过截留分子量为1KD的聚醚砜纳滤膜或聚酰胺纳滤膜，当未通过该纳滤膜的截留液体积缩小至步骤2浸出液体积的1/50至1/80时，收集截留液；步骤7，先向截留液加入无水甲醇或无水乙醇，无水甲醇或无水乙醇的用量为截留液体积的2-5倍；再向截留液加入甲基叔丁基醚或乙醚，甲基叔丁基醚或乙醚的用量为截留液体积的2-8倍，搅拌1-10分钟后静置；步骤8，分离并干燥步骤7中的析出物。所述的步骤8中的析出物的分离采用离心分离。、

优选的，所述的步骤5中的纳滤膜为截留分子量为5KD的聚醚砜纳滤膜，所述的步骤6中的纳滤膜为截留分子量为1KD的聚醚砜纳滤膜。

以上的方法能够适用于其他多种环脂肽的抗生素提纯，比如达托霉素、替考拉宁、万古霉素等。

采用以上的方法可以除去大多数杂质，得到恩拉霉素的粗品，纯化后恩拉霉素粗品的质量分数可以达到60-80%，收率可以达到70-90%。