[发明专利]一种恶臭假单胞菌用培养基

说明书

技术领域

本发明属于微生物培养技术领域，涉及一种微生物培养基，特别是涉及一种用于培养恶臭假单胞菌的培养基。

背景技术

硝基苯是化工行业的基本原料之一，主要应用于炸药、农药、染料等有机合成工业。由于硝基苯在水中具有较高的稳定性，一旦进入水体，就会造成水体较长时间的污染，另外，硝基苯毒性较强，不仅能够造成环境污染，而且一旦人吸入硝基苯蒸汽，还会引起急性中毒等。目前对硝基苯废水的处理方法主要有物理法、化学法和生物法。化学法和物理法处理硝基苯废水较多，但普遍存在二次污染和处理效果不理想等问题。生物法，特别是利用微生物处理该类废水是目前研究的热点。

有关硝基苯降解菌的研究已有文献报道，孙凌等(活性炭固定耐冷菌对硝基苯的降解特性，中国环境科学，2009，29(9)：941–945)用活性炭固定恶臭假单孢菌（Pseudomonas putida）进行了硝基苯的降解研究。李明堂，徐镜波，卢振兰，等(两株细菌对邻氯硝基苯的协同降解[J]，环境科学学报，2010，30(6)：1138–1143)研究结果表明Pseudomonas putida也可以降解对邻氯硝基苯。王琦等(硝基苯降解菌的筛选驯化及其最适降解条件研究，广东化工，2009，36(11)：216–219)研究表明，随着硝基苯浓度升高，短杆菌属细菌对其降解效率降低，硝基苯浓度为500mg/L时，去除率仅为82%。王书航等(硝基苯降解菌筛选和鉴定，合肥工业大学学报，2008，31(11)：1751–1754)研究表明，假单孢菌对初始质量浓度为25mg/L的硝基苯溶液经过168h培养，降解效率为81.86%。王松等(硝基苯微生物降解的优化条件研究)研究了硝基苯初始浓度、pH值、重金属和NaCl浓度对硝基苯降解率影响，结果表明硝基苯的初始体积比为1000μL/L，pH=8，NaCl质量浓度50mg/L，ZnCl₂质量浓度50mg/L时，硝基苯降解率可达72.9%。

但是，上述报道均存在微生物作用时间较长，降解效率不高，微生物对硝基苯的耐受性较低等问题。上述问题的本质是微生物数量少，培养条件差造成的。其原因是现在针对培养基的研究主要集中在菌种生长所需碳源、氮源和无机盐等常规营养元素上，并未考虑到培养基中假单孢菌生长过程中所需要的限制成份。

发明内容

本发明的目的是提供一种恶臭假单胞菌用培养基，以本发明的培养基培养出的恶臭假单胞菌培养时间快，生长速度快、菌株耐受性高，适应能力强。

每1000mL本发明的恶臭假单胞菌用培养基中，各组分的含量分别为：

牛肉膏7～13g，尿素2～5g，磷酸氢二钾2～3g，磷酸二氢钾0.5～2g，氯化钙0.3～1.2g，硝酸钠3.4～5.6g，微量元素和生长因子溶液1～5mL，去离子水余量。

其中，所述的微量元素和生长因子溶液中含MoSO₄ 2.4～3.6mmol/L，CuCl₂ 1.5～2.8mmol/L，ZnCl₂ 3.0～4.0mmol/L，FeSO₄ 4.2～4.8mmol/L，尿嘧啶15～21mmol/L，VB₆ 20～35mmol/L，L-色氨酸30～50mmol/L。

本发明制备得到的培养基的pH值范围调节为7.5～8.2。

进一步地，每1000mL本发明的恶臭假单胞菌用培养基中，各组分的含量分别为：

牛肉膏8.6～10.8g，尿素2.3～4.6g，磷酸氢二钾2.2～2.7g，磷酸二氢钾0.6～1.7g，氯化钙0.4～1.0g，硝酸钠3.4～4.3g，微量元素和生长因子溶液1mL，去离子水余量。

优选地，每1000mL本发明的恶臭假单胞菌用培养基中含有牛肉膏10g，尿素4.2g，磷酸氢二钾2.96g，磷酸二氢钾0.84g，氯化钙0.8g，硝酸钠4g，微量元素和生长因子溶液1mL，去离子水余量。

将恶臭假单胞菌株接入本发明的培养基，于27～32℃，摇床转速120～150r/min下培养12～24h，即可得到高浓度铜绿假单孢菌液。