[发明专利]一种从虎杖中制备高纯度白藜芦醇的方法

权利要求书

1.一种从虎杖中制备高纯度白藜芦醇的方法，其特征在于包括以下步骤：

a.白藜芦醇的粗提：以虎杖为原料，用有机溶剂回流搅拌提取，过滤，残渣按上述步骤再提取两遍，过滤，收集滤液，合并3次滤液；滤渣用挤干机挤干，收集液体，残渣用蒸渣机回收残留的溶剂；合并提取液，提取液真空浓缩至无有机溶剂，待酶解；

b.酶解：将浓缩液加水进行分散，调节pH=4-5，然后加入一定量由β-葡萄糖苷酶、纤维素酶和β-葡聚糖苷酶按一定比例配制的复合酶，搅拌，在一定的温度下酶解时间为12-24 h；HPLC检测酶解液中的虎杖苷直至检测不出虎杖苷，酶解完成后酶解液待萃取；

c.萃取：将上述的酶解液用乙酸乙酯、氯仿、石油醚、乙醚中的一种或者几种混合溶剂进行萃取；在萃取过程中会出现不同程度的乳化现象，将乳化层分离出来后用超声波设备进行破乳处理，收集萃取相，合并萃取相；将萃取相真空浓缩，回收溶剂，得白藜芦醇样品I，待用硅胶柱层析纯化；

d.硅胶柱层析纯化白藜芦醇：称取一定量的层析硅胶并进行活化，然后湿法装入不锈钢层析柱中，并用流动相平衡层析柱；将上述的白藜芦醇样品Ⅰ用流动相溶解后湿法上样；然后用石油醚、乙酸乙酯、甲醇混合液为洗脱剂进行等梯度洗脱；分步收集流出液，TLC检测流出液，合并含有白藜芦醇成份的流出液，回收溶剂，干燥得白藜芦醇样品II；白藜芦醇样品II待用中压C₁₈键合硅胶ODS柱层析纯化；

e.中压C₁₈键合硅胶ODS柱层析纯化：将C₁₈键合硅胶湿法装入动态轴向不锈钢中压层析柱，用加压装置进行压缩，并用流动相平衡层析柱；将上述的白藜芦醇样品II用流动相进行溶解，湿法上样；以甲醇水混合液为洗脱剂进行等梯度洗脱，紫外检测器在线监测，分步收集色谱峰对应流出液，HPLC检测流出液，合并具有相同成份的流出液，回收溶剂，干燥得高纯度白藜芦醇样品III和低纯度白藜芦醇样品IV；经HPLC检测，白藜芦醇样品III纯度达98%以上；

f.将上述的低纯度白藜芦醇样品IV用甲醇、乙醇、丙酮一种或几种混合溶剂的水溶液重结晶纯化；晶体经过HPLC检测，白藜芦醇纯度达98%以上。

2.按照权利要1所述的一种从虎杖中制备高纯度白藜芦醇的方法，其特征在于：

步骤a中所述的虎杖粉碎至20-40 目，提取溶剂为甲醇、乙醇或者丙酮水溶液，浓度为60%-80%（v/v），提取的温度为50-60℃，提取时间为2-4 h，料液比为1:6-1:10，提取次数为3次；

步骤a中所述的滤渣用挤干机挤干，收集液体，残渣用蒸渣机回收残留的溶剂；

步骤a中所述的真空浓缩时的温度为55-60℃，浓缩液比重为1.10-1.25。

3.按照权利要1所述的一种从虎杖中制备高纯度白藜芦醇的方法，其特征在于：

步骤b中所述的加水量为1-2倍浓缩液体积；

步骤b中所述的pH调节酸为柠檬酸或盐酸；

步骤b中所述的酶解pH为4-5，酶解温度为45-55℃，加入的复合酶量为虎杖原料质量的0.2%-0.4%；

步骤b中所述的复合酶为β-葡萄糖苷酶、纤维素酶和β-葡聚糖苷酶按一定比例配制，其中比例为4:1:2-2:1:1（m/m）；

步骤b中所述的搅拌频率为20-40 rpm；

步骤b中所述的酶解时间为12-24 h，HPLC检测酶解液中的虎杖苷直至检测不出虎杖苷。

4.按照权利要1所述的一种从虎杖中制备高纯度白藜芦醇的方法，其特征在于：

步骤c中所述的萃取溶剂为乙酸乙酯、氯仿、石油醚、乙醚中的一种或者几种混合溶剂；

步骤c中所述的萃取温度为室温，每次萃取剂用量为萃余相体积的的1-1.5倍；

步骤c中所述的萃取搅拌时间为15 min，静置时间为30-45 min；

步骤c中所述的萃取次数为3-5次；

步骤c中所述的乳化层用超声波设备进行处理；

步骤c中所述的真空浓缩温度为45-50℃。