[发明专利]沙葱叶片黄酮类物质的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种黄酮类物质的提取方法，特别指沙葱叶片黄酮类物质的提取方法。 

背景技术

植物是生物活性化合物的巨大天然宝库，其产生的次生代谢产物超过400000种。其中黄酮类化合物是一种在植物界中广泛分布的酚类化合物。大量研究表明，黄酮类化合物具有清除自由基、抗氧化、抗突变、抗肿瘤、抗菌、抗病毒和调节免疫、防治血管硬化、降血糖等功能。现在对黄酮提取的研究主要集中在于芸香科、唇形科、豆科、伞形科、银杏科和菊科中。尽管很早就有葱属植物含黄酮成分的报道，但具体研究很少。目前仅从其中几种植物中分出少量的黄酮苷。张沐新等研究了分蘖葱头总黄酮的提取技术，结果显示分蘖葱头含黄酮类物质0.4261g/g。张泽英研究了大蒜黄酮提取工艺，大蒜含黄酮类物质3.76％，说明葱属植物也含有较高含量的黄酮类物质。 

沙葱(Allium mongolicum Regel.)别名蒙古韭，广泛分布我国新疆东北部、青海北部、甘肃北部、宁夏北部、陕西北部、内蒙古和辽宁西部。生长在海拔800～2400m的荒漠、沙地或半干旱山坡。叶及花可食，地上部分可入蒙药，能健胃、消食、杀虫，主治消化不良、不思饮食、秃疮、青腿病等，各种牲畜均喜食，为一等饲用植物。沙葱做为一种具有药用价值的野生蔬菜，对其粗黄酮含量和抗氧化性进行研究，进一步完善黄酮类物质提取技术和不同方法提取的黄酮类物质的检测，为沙葱的进一步开发利用提供理论依据是很有意义的。 

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种沙葱叶片黄酮类物质的提 取方法，这种提取方法进行试验条件的优化，为提取出的粗黄酮提取液进行体外模拟抗氧化能力检测。 

本提取方法采用热回流提取技术提取沙葱叶片干粉黄酮，其技术简单，可以实行工厂化生产。并对最佳提取技术参数进行优化，具体技术参数有：样液比(1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40)；萃取提取时间(2h、2.5h、3h、3.5h、4h)；萃取的酒精浓度(20％、40％、60％、80％、100％)；萃取温度(50℃、60℃、70℃、80℃、90℃)。抗氧化性检测是进行黄酮粗提取液对·OH的清除作用和黄酮粗提取液清除活性氧自由基O₂·-的方法。 

本发明要解决的技术问题由如下方案来实现：沙葱叶片黄酮类物质的提取方法，其特征是：阴干沙葱叶片用粉碎机粉碎，过20-30目筛子，放入热回流提取器中，每1g干粉加30～40ml的55％～65％的乙醇浸泡，水浴锅加热，进行热回流提取，温度50℃或90℃，提取3-4h，结束后在三角瓶中加1.5-3g活性炭粉末，混匀，滤纸过滤，用旋转蒸发仪蒸干液体，即得沙葱粗黄酮干样。 

具体步骤如下： 

1最适萃取条件的选择 

采用正交设计，对最佳试验方法后进行试验条件的选择，对乙醇浓度、乙醇用量、时间、温度四个实验条件进行筛选，每种实验条件五个梯度，见表： 

热回流提取结束后向提取溶液中加入1.5g活性炭粉末，混匀后滤纸过滤。旋转蒸发仪蒸干，然后用酒精定容到100ml。 

2检测条件 

参考大蒜黄酮检测方法，10ml提取的黄酮溶液，加入10％的NaNO2溶液1ml，摇匀后放置5min，加入10％的Al(NO₃)₃溶液1ml，摇匀后放置5min，再加入5％的NaOH溶液10ml，然后定容在25ml，在510nm下比色。以不加提取液作为空白试剂。 

3标准曲线的绘制 

准确称取干燥至恒重的芦丁标准品，用95％乙醇定容，配制成20mg/ml的标准应用液备用。准确吸取标准应用液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分别置于25ml比色管中，同样按照上面的NaNO₂-Al(NO₃)₃-NaOH的步骤显色，15min后同样以不加标准应用液的试管作空白试剂，在最大特征吸收波长510nm处测定各个标样的吸光度。 

4抗氧化性研究 

提取的沙葱叶粗黄酮用旋转蒸发仪蒸干，用蒸馏水溶解至3μg/ml备用。 

4.1黄酮对·OH的清除作用