[发明专利]一株无毒ST28猪链球菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及到一株无毒ST28猪链球菌及其应用，具体说是一株无毒ST28猪链球菌（Streptococcus suis）的分离、鉴定方法，以及该菌在猪链球菌病疫苗研制中的应用，属生物技术领域。

背景技术

猪链球菌2型（Streptococcus suis serotype 2，S. suis 2）是一种重要的人畜共患病病原体，可以引起猪发生脑膜炎、败血症、关节炎等症状，病死率高达40%，如与猪呼吸与繁殖综合征并发，死亡率更高，即使病后能够存活的猪，其生长缓慢，料肉比增加，给养猪业带来极大的经济损失，故该菌对全球的养猪生产是一个潜在的威胁。S. suis 2可以通过伤口、消化道感染人，1998年和2005年分别在我国江苏和四川发生猪链球菌病的暴发，并且均发生人感染死亡的病例，引起人们的高度关注。目前针对猪链球菌病，尚无适用人群的疫苗，所以预防猪发生猪链球菌病，不仅仅是对猪的保护，更是对人的保障。

依据动物疫病“以防代治”的理念，免疫疫苗是猪链球菌病防控的关键，传统的疫苗包括灭活疫苗和减毒活疫苗，灭活疫苗是将细菌通过灭活处理获得的全菌体死疫苗，灭活疫苗优点是生产方便，稳定、易保存，缺点是需要多次免疫、免疫剂量大并且免疫部位出现损伤。减毒活疫苗的优点是只需接种一次，接种剂量少，且免疫保护期长，缺点是不稳定、难保存，并且有可能出现毒力返强。上述两类疫苗是菌体疫苗，抗原成份比较复杂，除了保护抗原外，可能含有更多的无效抗原，而无效抗原的存在会干扰机体对保护性抗原的应答，有时会引起严重的副作用。

发明内容

技术问题

针对上述传统疫苗的不足，本发明提供一株无毒ST28猪链球菌的分离、鉴定及应用，从健康屠宰猪群中分离一株无毒ST28猪链球菌，为S. suis 2毒力因子研究及猪链球菌保护性抗原筛选奠定基础。

技术方案

本发明经过聚合酶链式反应、革兰氏染色、血清凝集试验和多位点序列分型（MLST），证实所分离的猪链球菌为ST28猪链球菌，命名该菌为HA0609。

通过Balb/c小鼠、新西兰兔、长白仔猪的动物实验，结果HA0609不引起上述试验动物发病，并且接种长白仔猪不引起组织病理变化，而以05年四川分离的强毒株ZY05719为对照，等量接种实验动物后，均能引发动物发病、死亡，证实HA0609菌株为无毒菌株。

细菌特征：该菌属于球菌科、链球菌属，为革兰氏阳性菌，兼性厌氧，呈卵圆形，排列成链状或成双，5%绵羊血THB琼脂平板上37℃培养18～24小时，可长成直径1～2毫米，灰白色，表面光滑，边缘整齐的小菌落，不溶血。

该菌1次肌肉注射新西兰兔、2次腹腔注射CD1小鼠后，能够提供受免动物一定的免疫能力，对HA0609免疫保护性抗原的分析，可用于猪链球菌病亚单位疫苗的研制。

 

有益效果

本发明的突出优点：

1. HA0609对多种实验动物均无致病力，且对长白仔猪不造成病理损伤；

2. HA0609分离自健康猪的扁桃体组织，能够定植于猪扁桃体组织，持续刺激机体的免疫系统，使机体应答产生抗体。

3．该菌1次肌肉注射新西兰兔、2次腹腔注射CD1小鼠后，能够提供受免动物一定的免疫能力，对HA0609免疫保护性抗原的分析，可用于猪链球菌病亚单位疫苗的研制。

 

生物保藏

该菌株HA0609分类命名：猪链球菌（Streptococcus suis），2012年10月10日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉 武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M 2012394。

附图说明

图1为免疫HA0609新西兰兔静脉注射强毒株ZY05719后存活率分析图，1为免疫PBS对照组，2为免疫HA0609组，﹡表示存在统计学显著差异；

图2为免疫HA0609的CD1小鼠腹腔注射强毒株SS2-1后存活率分析图，1为免疫PBS对照组，2为免疫HA0609组，﹡﹡表示存在统计学极显著差异。

 

具体实施方式

材料：

PCR Mix（广州东盛生物科技有限公司）

DNA胶回收试剂盒（Axygen公司）