[发明专利]具有经修饰的ERNS蛋白的牛病毒性腹泻病毒

说明书

本申请是申请日为2009年11月23日、申请号为200980148483.7的同名申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及新的嵌合瘟病毒及其在免疫原性组合物和疫苗中的用途。本发明还涉及用于治疗或预防牛病毒性腹泻病毒感染的传播的方法和试剂盒。本发明还涉及嵌合瘟病毒在用于区分经接种的动物和经野生型病毒感染的动物的方法和试剂盒中的用途。

背景技术

已经从饲养的和野生的数种动物物种中分离了瘟病毒，包括牛病毒性腹泻病毒(BVD病毒或BVDV)。鉴定的BVDV的宿主包括水牛、羚羊、驯鹿和多种鹿的物种，并且在长颈鹿和叉角羚中已经鉴定了独特的瘟病毒的种。BVDV是黄病毒科的小RNA病毒。其与其它的瘟病毒(其是绵羊中的边界病和猪中的猪瘟(classical swine fever)的诱因剂)密切相关。最近，鉴定出一种被称作Bungowannah瘟病毒的不同的瘟病毒，其是澳大利亚猪崽胎儿感染的致病剂。

由BVDV引起的疾病、尤其是牛中的疾病十分广泛，可以带来经济上的破坏。牛中的BVDV感染可以引起育种上的问题，并且可以导致流产或早产。BVDV能够穿过孕牛的胎盘，并且可以持续感染(PI)小牛，使之对该病毒免疫耐受并且此后终其一生持续病毒血症。被感染的牛还可可表现出“粘膜病”，该病的特征在于体温升高、腹泻、咳嗽和消化系统粘膜的溃疡。这些持续感染的动物在牧群中提供了导致进一步爆发粘膜病的病毒的传播源，并且极易感染引起肠病或肺炎的微生物。

BVDV被分成两种生物型。＂cp＂生物型的BVDV在培养的细胞中诱导引起细胞病变的效应，而非细胞病变性或＂ncp＂生物型的病毒则不诱导此效应。此外，识别了两种主要的基因型(1型和2型)，已经证明二者都引起多种临床上的症状。

BVDV病毒粒子的直径为40-60nm。BVDV的核衣壳由单个RNA分子和衣壳蛋白C组成。核衣壳由脂膜包围，脂膜上锚定有两种糖蛋白E1和E2。第3种糖蛋白E^rns与被膜松散地结合。BVDV基因组的长度是大约12.5kb，其包含位于5'和3'非翻译区(NTR)之间的单个开放阅读框。从该开放阅读框翻译出大约438kD的多聚蛋白，并且该多聚蛋白由细胞和病毒蛋白酶加工成至少11个病毒结构性和非结构性(NS)蛋白(Tautz,et al.,J.Virol.71:5415-5422(1997);Xu,et al.,J.Virol.71:5312-5322(1997);Elbers,et al.,J.Virol.70:4131-4135(1996);和Wiskerchen,et al.,Virology 184:341-350(1991))。BVDV的基因组顺序是p20/N^pro、p14/C、gp48/E^rns、gp25/E1、gp53/E2、p54/NS2、p80/NS3、p10/NS4A、p32/NS4B、p58/NS5A和p75/NS5B。三种被膜蛋白gp48/E^rns、gp25/E1和gp53/E2是高度糖基化的。E^rns(以前被称作E0或gp48)形成通过二硫键共价连接的同二聚体。疏水性膜锚定区的缺失说明E^rns与被膜松散地结合。E^rns在感染的牛中诱导高抗体滴度，但是抗血清具有有限的病毒中和活性。

目前可获得的BVDV疫苗有：包含化学灭活的野生型病毒的疫苗。这些疫苗通常需要多剂给药，并且产生短期的免疫应答；另外，它们不提供针对病毒的胎儿传播的保护。在绵羊中，已经报道了基于纯化的E2蛋白的亚单位疫苗。虽然该疫苗似乎保护胎儿免受感染，但是保护仅限于病毒的同源株，并且抗体滴度与保护之间没有关联。

已经使用通过在牛或猪细胞中重复传代或者通过化学诱导赋予病毒温度敏感性表型的突变而减毒的病毒生产出了改良式活(ML)BVDV疫苗。已经证明单剂MLV BVDV疫苗足以提供抗感染的保护，并且接种的牛中的免疫力的持续时间可以延伸数年。此外，已经报道了使用MLV疫苗的交叉保护(Martin等人，见“Proceedings of the Conference of Research Workers in Animal Diseases”,75:183(1994))。然而，现有的MLV疫苗不能区分经接种的和天然感染的动物。