[发明专利]一种核苷类衍生物的应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物来源杀菌剂，具体的说是一种核苷类衍生物在防治黄瓜细菌性角斑病上的应用。

背景技术

黄瓜作为我国最主要的蔬菜品种之一，随着栽培面积的扩大及栽培方式的多样化，各种病害发生日趋严重。其中黄瓜细菌性角斑病近年来发病广泛，其病原菌为丁香假单胞杆菌黄瓜角斑致病型，可侵染黄瓜幼苗及成株各个时期，造成严重减产。目前防治手段主要依靠化学合成农药，虽然有一定防治效果，但是病原菌的抗药性也在不断升级，同时带来了环境污染、人畜中毒与三致（致癌、致畸、致突变）等问题。

核苷类衍生物具有很好的抗病毒和抗肿瘤活性，以往人们对它的药理作用研究较多，如专利200510015609.7公开了拉米夫定核苷衍生物作为抗艾滋病病毒和抗乙肝病毒药物原料药的应用，但将其作为防治黄瓜细菌性角斑病的生物农药的研究还未见报道。生物农药具有毒性较小、环境友好及不易产生抗药性等优点，可以在保证较好防治效果的同时解决农药残留超标等问题，符合未来绿色农业发展趋势。

发明内容

本发明的目的在于提供一种核苷类衍生物的应用。

本发明所采用的技术方案为：一种核苷类衍生物在制备防治丁香假单胞杆菌黄瓜角斑致病型的杀菌剂中的应用；所述核苷类衍生物如式（一）所示：

所述杀菌剂可以为水剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。

所述式（一）核苷类衍生物为化合物thymidine，是已知物质，可按如下方法制备：由绿色木霉经发酵培养、提取分离而获得。

本发明所具有的优点：上述式（一）化合物thymidine对丁香假单胞杆菌黄瓜角斑致病型的MIC值为16μg/mL，表明该核苷类衍生物对丁香假单胞杆菌黄瓜角斑致病型具有较好抑制效果，可以作为具有杀菌作用的新农药成分或先导化合物。

本发明所涉及的核苷类衍生物作为微生物来源天然产物，只含有碳、氢、氧、氮四种元素，与传统的化学合成农药成分相比，具有环境友好、对人畜毒性低等优点；上述核苷类衍生物可以利用微生物进行规模发酵，相比化学合成方法具有生产工艺简单，周期短、产品成本低等特点。

具体实施方式

为阐明对本发明特征的理解，下面结合一些非限定性的实施实例对本发明做进一步阐述。

实施例1

本发明杀菌剂可湿性粉剂配制方法：由绿色木霉经发酵培养，（发酵培养过程可参见文献Chin.J.Nat.Med.2008,6,395-398中的记载进行）；将绿色木霉发酵液进行压滤和沉淀，将上清液浓缩，使式（一）所示核苷类衍生物含量为1.5-2.0wt%，以浓缩上清液质量为基数，加入25-35%白炭黑进行吸附，然后添加3-8%十二烷基硫酸钠，0.8-1.2%CMC和2-4%拉开粉（均为南京化工公司产品），再加入凹凸棒土制成式（一）核苷类衍生物含量0.5wt%的可湿性粉剂。

使用方法：500倍液喷雾在黄瓜叶片上。

实施例2：抑菌活性试验

采用微量稀释法（《从天然产物到新农药创制-原理方法》吴文君，2006，化学工业出版社），测定式（一）化合物thymidine对丁香假单胞杆菌黄瓜角斑致病型的抑菌活性。

1）菌悬液的制备

将供试细菌接种于LB培养基表面，于37℃培养24h后，吸取2mL无菌0.85%NaCl溶液（含0.25%吐温-20）洗涤培养物，并用玻璃刮刀将菌落轻轻刮下。吸取适量菌悬液于无菌试管中，调至0.5麦氏比浊（相当于1.5×10⁸CFU/mL）备用；

2）样品的配制

分别取1mg待测样品（式（一）化合物）和阳性对照（氯霉素），溶解于100μL DMSO中，充分混匀后，吸取50μL样品溶液到另一只离心管中，接着加入50μL DMSO，得到浓度减半的样品溶液。按照此方法，得到12组浓度依次减半的样品溶液。

3）MIC测定方法

（1）采用无菌操作，将倍比稀释后不同浓度的样品溶液分别加到无菌的96孔聚苯乙烯板中，第1至第12孔加样品溶液，每孔5μL，第12孔不加样品作为阴性对照。

（2）将相当于0.5麦氏比浊度的指示菌悬液，经MH肉汤培养基稀释1000后，取95μL依次加入到96孔板中，使得第1至第12孔的样品浓度依次为512、256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5和0.25μg/mL。轻轻震荡混匀后，将96孔板密封置于37℃生化培养箱中培养24h。