[发明专利]一种治疗性疫苗佐剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种治疗性疫苗佐剂，更具体的说，涉及一种治疗性疫苗佐剂的组合物，其包含的抗白细胞介素10受体通过静电作用或π-π堆垛等物理作用吸附在氧化石墨烯(Graphene oxide，GO)上。

背景技术

慢性感染某些病毒可以引起癌症。感染人乳头瘤病毒可以引起宫颈癌，而乙型肝炎病毒感染与肝癌的发生有关。目前此类疾病尚无特效治疗药物。虽然预防慢性病毒感染的疫苗，如乙型肝炎病毒(HBV)疫苗、人乳头瘤病毒疫苗(HPV)已经在临床应用，但是针对已经感染慢性病毒病人的治疗性疫苗的研究，仍然处于起步阶段。治疗性疫苗是有效治疗慢性病毒感染所致癌症的研发热点和难点。治疗性疫苗至少由2种成分构成，其一是特异性抗原，其二是免疫佐剂，两种成分都会影响治疗性疫苗的治疗效果，因此，佐剂的研发在治疗性疫苗的发展中起至关重要的作用。

慢性病毒感染和肿瘤的发生、发展是其与机体免疫系统长期对抗的结果。为避免被机体免疫系统清除，病毒感染和肿瘤微环境逐渐发展成不利于免疫细胞功能的免疫抑制区。这一环境包括抑制细胞如调节T细胞、肿瘤相关巨噬细胞、抑制性树突细胞；免疫抑制因子如IL10、TGFβ等；肿瘤细胞膜上抑制分子如PD-1在肿瘤细胞的表达。机体产生的这些对病毒或肿瘤抗原的无效的体液和细胞免疫反应，往往可抑制固有和特异性免疫反应，影响治疗性疫苗的效率。研究发现乳头瘤病毒抗原暴露的小鼠可抑制治疗性疫苗细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应。PV L1核壳蛋白(L1VLPs)致敏(prime)的小鼠，在接种携带HPV16E7CTL，HIV CTL决定簇的PV嵌和型L1的蛋白(L1E7，L1P18)治疗性疫苗后，与未致敏小鼠相比，其E7、HIV P18特异性的CTL细胞分泌IFNγ受到抑制。不同研究小组也观察到同样的现象。如果PV L1蛋白致敏(primed)的小鼠是IL10缺陷鼠，在接种携带HPV16E7CTL决定簇的PV嵌和型L1的蛋白治疗性疫苗后，与未致敏小鼠相比，其E7特异性的CTL细胞产生IFNγ则不受到抑制。如果在免疫致敏小鼠时同时阻断IL10，E7特异性CTL也不受到抑制。DNA疫苗免疫时阻断IL10，可以提高疫苗诱导的T细胞反应，清除小鼠LCMV病毒感染。综上所述，IL10与慢性病毒感染密切相关，治疗性疫苗如果在免疫时阻断IL10，可以提高疫苗诱导的T细胞反应，提高慢性人乳头瘤病毒感染治疗性疫苗的效率，清除慢性病毒感染，阻断宫颈癌的发生。类似的研究发现阻断IL10、肿瘤局部注射Toll样受体配体CpG可以抑制小鼠肠癌细胞、黑色素瘤细胞的生长。

氧化石墨烯(Graphene oxide，GO)是一种碳纳米材料，由石墨经化学氧化形成。GO由单层碳原子组成，边缘含有大量的羰基、羧基等含氧活性基团，可提供了一个PH依赖的阴性电荷表面和胶体稳定性，因此具有良好的生物相容性和水溶液稳定性，同时有利于化学功能化修饰，以达到在不同领域应用的目的。由于单原子层两个基面都可以吸附，具有其他纳米材料无法比拟的超高载药率，因此，微量GO可以吸附更多的药物、抗原或免疫刺激因子。有报道GO被用于承载化疗药物5-FU和阿霉素，可使药物缓慢释放，且发现荷瘤小鼠静脉注射GO，GO能蓄积在肿瘤部位，表明局部给予GO和化疗药物，比单独给予化疗药物，可以更长时间的维持免疫刺激强度和抗肿瘤药物浓度。GO对机体是安全的，小鼠静脉注射250μg GO，也没有观察到明显副作用，具有良好的生物安全性。研究表明GO也可以有效地吸附单链DNA(ssDNA)，保护ssDNA免受酶的降解，这一特性提示GO可连接CpG，CpG是Toll样受体9的配体，常常作为佐剂和用来打破免疫抑制的环境。GO可以吸附化疗药、ssDNA、CpG等，使得GO可以成为一个可以打破免疫抑制环境的很好的候选载体。本发明采用GO吸附抗白细胞介素10受体抗体的治疗性疫苗佐剂，尚未见文献报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：采用GO吸附抗白细胞介素10受体抗体的治疗性疫苗佐剂，以作为慢性病毒感染性疾病及肿瘤等的治疗性疫苗的佐剂，例如人乳头瘤病毒、乙型或丙型肝炎病毒等慢性病毒性感染疾病和癌症等，这些疾病的治疗需要特异性细胞免疫应答以清除受感染的细胞或肿瘤细胞。

本发明的技术方案是：一种治疗性疫苗佐剂，其特征在于所述佐剂由氧化石墨烯(GO)通过静电或π-π堆垛等物理作用吸附抗白细胞介素10受体(anti-IL10R)抗体组成，其中GO和anti-IL10R的重量比为2∶3。