[发明专利]一种用于检测志贺氏菌的分子马达生物传感器试剂盒

说明书

技术领域

本发明是关于动物源性食品微生物快速检测技术的一种。

背景技术

传统的病原菌检测方法要求对每个检验项目进行非选择性增菌、选择性增菌、分离、筛选和鉴定等步骤，一般需要5天才能出具检测报告，严重影响货物的品质和货架寿命。一些新的技术如PCR技术、免疫学检测技术、生物芯片技术等检测方法仍依赖于传统的检测步骤，即需要进行增菌，耗时耗力，完成一次检测通常需要几天的时间。这样不仅增加了实验室的工作量，而且也不利于食品工业中生产流程的监测、终产品的质量控制以及政府部门对食品安全的管理和控制。由于进出口食品的大量增加，因此急需可靠有效的快速检测方法，缩短检测时间，促进我国食品的进出口贸易。

发明内容

以受控分子马达技术为核心，集成核酸探针识别、荧光探针标记与检测等技术，建立了一个全新概念的快速检测技术体系。利用ATP酶作为载体对目标物进行检测具有灵敏度高、特异性强、快速的特点。在F₀F₁-ATPase分子马达连接上特异的核酸探针，可以实现对特定食品微生物的快速、特异性、高通量的检测。本发明可将检测时间缩短至2天，且检测灵敏度能达到10²CFU/ml，满足现有的食品微生物检测范围。

附图说明

附图1为分子马达生物传感器模式图(其中a、b、c、α、β、δ、γ、ε均为ATP合酶亚基)，1为ε亚基抗体，2为链霉亲和素(Strptavidin)，3为N-biotin，4为IpaH探针，5为志贺氏菌单链DNA。

附图2为chro IpaH对不同种菌株的检测结果，纵坐标表示荧光值，横坐标表示检测的样本，其中1为水，2为志贺氏菌，3为副溶血性弧菌，4为大肠杆菌，5为沙门氏菌，6为霍乱弧菌，7为阪崎肠杆菌。

具体实施方式

根据志贺氏菌IpaH基因设计特异性核酸探针5’-attccgtgaacaggtcgctgcatggct，其中探针的5’用生物素进行标记。将该探针通过生物素抗体连接在分子马达上面，利用分子马达生物传感器即可对待测样本的DNA进行检测，当样品为志贺氏菌DNA时，检测体系的荧光值会发生明显的变化，通过这一变化即可判断样本为阳性。为此，我们设计了一个试剂盒，可以方便、快速对食品中的志贺氏菌进行检测。

试剂盒组成：