[发明专利]一种检测Tim-3的ELISA试剂盒

权利要求书

1.一种抗人Tim-3中和性单克隆抗体或其片段，包括轻链CDR1-3和重链CDR1-3，其特征在于，所述轻链CDR1-3的氨基酸序列为：

CDR1：如序列表中SEQ ID NO：5所示；

CDR2：如序列表中SEQ ID NO：6所示；

CDR3：如序列表中SEQ ID NO：7所示；

所述重链CDR1-3的氨基酸序列为：

CDR1：如序列表中SEQ ID NO：8所示；

CDR2：如序列表中SEQ ID NO：9所示；

CDR3：如序列表中SEQ ID NO：10所示。

2.如权利要求1所述的单克隆抗体或其片段，其特征在于，所述轻链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示，所述重链可变区的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO：2所示。

3.如权利要求1-2任意一项所述的单克隆抗体或其片段，其特征在于，所述轻链可变区的编码序列如序列表中SEQ ID NO：3的核甘酸序列所示，所述重链可变区的编码序列如序列表中SEQ ID NO：4的核甘酸序列所示。

4.一种含有权利要求1-3任意一项所述的单克隆抗体或其片段的Tim-3检测试剂盒。

5.一种检测Tim-3的ELISA试剂盒，所述试剂盒包括如权利要求1-3任意一项所述的单克隆抗体或其片段。

6.如权利要求5所述的一种检测Tim-3的ELISA试剂盒，还包括rhGal-9蛋白、HRP标记的羊抗小鼠IgG抗体、辣根过氧化物酶底物缓冲液、蛋白标准品人Tim-3(100ug/ml，0.1ml)、阴性对照样品BSA。

7.如权利要求5所述的种检测Tim-3的ELISA试剂盒，其使用方法如下：

1)包被重组人rhGal-9蛋白(10ug/ml)到高亲和力ELISA板中，4℃过夜后用含0.2％吐温的PBS缓冲液洗涤5次；

2)按合适的稀释度1∶2～1∶10稀释正常人或患者的血浆，加入到包被有rhGal-9的ELISA板条中，37℃孵育1小时，用含0.2％吐温的PBS缓冲液洗涤5次；

3)加入抗人Tim-3的抗体L3C，37℃孵育1小时，用含0.2％吐温的PBS缓冲液洗涤5次；

4)最后加入羊抗小鼠HRP标记的抗体，37度孵育0.5小时，用含0.2％吐温的PBS缓冲液洗涤5次；

5)最后加入TMB显色，2N硫酸终止后检测OD450的值，通过分析OD450值的大小，判断人血清中Tim-3浓度。