[发明专利]用于质谱法检测的底物和内标

说明书

本申请是分案申请，原申请的申请日为2007年3月13日、申请号为200780014149.3(PCT/US2007/063894)、发明名称为“用于质谱法检测的底物和内标”。

相关申请的交叉参考

本申请要求2006年3月13日提交的美国临时专利申请序列号60/781,855的优先权，其被引入本文作为参考。

发明领域

本发明涉及分析试剂和基于质谱法的方法，所述方法使用这些试剂来同时量化样品中的蛋白质。更具体而言，本发明涉及使用质谱法量化溶酶体酶活性的多元分析和试剂。

发明背景

溶酶体贮积病是一组遗传病症，其特征为身体内特定酶的缺乏，这导致身体不能分解代谢物质。作为一个实例，法布里病是每40,000人之一人中可见的溶酶体贮积病。其是由于α-半乳糖苷酶的缺乏，然后这导致身体不能分解被称为球形三酰神经酰胺(globotriaosylceramide)的特定脂质。第二个实例是高歇病，由于不能分解被称为葡糖神经酰胺(也称为葡糖脑苷脂)的脂物质（fatty substance）或脂质（lipids）引起的溶酶体贮积病。患有高歇病的个体不能制造葡糖脑苷脂酶，一种分解这些脂质所需要的酶。然后，这些脂质聚集在肝、脾和骨髓的细胞内。第三个实例是蓬珀病，由于被需要用来分解某些被称为糖原的糖的酶——酸性α-葡糖苷酶——的缺乏引起的溶酶体贮积病。当酶——酸性α-葡糖苷酶——缺少时，糖原在身体内的多种组织和器官中聚集。

这些疾病大部分是儿科疾病。在大多数患者中，患者在出生时是正常的，在过后的一些时间里渐进地开始神经学上恶化。在一些患者中，该疾病在成年期表现。临床表型取决于生化缺陷的类型和严重性。这些溶酶体缺陷症的一些例如蓬珀病和克腊比病，主要表现在婴儿期。因此，已经正在努力开发在临床症状开始前检测这些病症的方法，以便可以开始治疗介入。

在过去的十年内，检测代谢性疾病的实验室已经将串联质谱法引入其新生儿筛查计划。串联质谱法在临床继续得到流行，因为该技术允许在单一样品中分析多种代谢物。例如，该技术已被作为检测在新生儿中遗传代谢性疾病的常规临床实践，在该技术中使用干血斑样品(Schulze A等,Pediatrics 2003;111:1399-406)。尽管溶酶体酶活性可使用串联质谱法量化(Gelb MH等,Clinical Chemistry 50:10,1785-1796,2004)，但是发表的分析方法不容易适用于临床情况，这是因为麻烦的过程和苛刻的分析成分例如氯仿。

因此，继续需要改进用于检测溶酶体缺陷症的方法和组合物。

发明概述

根据本发明的实施方式，提供使用质谱法检测酶反应的改进的组合物和方法。

发明的底物(substrate)具有A—(B¹—B²—B³)的通式，其中A是单糖或二糖，B¹是C₁-C₂₀烷基、具有取代的C₆-C₂₀芳基的C₁-C₂₀、含有N、O或S杂原子的C₆-C₂₀杂环；B²是