[发明专利]一株黄单胞菌突变体及其构建方法和应用

权利要求书

1.一株黄单胞菌突变体，命名为XC2460，其保藏编号为CGMCC No.6583。

2.根据权利要求1所述的黄单胞菌突变体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、通过两步同源重组法敲除野生型黄单胞菌菌株Xcc 8004的XC_2460基因；

B、分别使用上游引物对XC_2460-U-F/XC_2460-U-R和下游引物对XC_2460-D-F/XC_2460-D-R PCR扩增XC_2460的上游500bp片段和下游500bp片段；

C、以上述两个扩增的片段为模板，利用引物对XC_2460-U-F/XC_2460-D-R通过重叠PCR方法，将这两个片段融合；

D、将两个融合片段与质粒pK18mobsacB进行EcoR I/HindIII双酶切，回收酶切片段后，用T4DNA连接酶进行连接，获得质粒pK18mobsacB-Xc2460；

E、最后，借助于辅助菌株E.coli S17-1(λpir)接合的方式将质粒pK18mobsacB-Xc2460转入野生型黄单胞菌菌株Xcc 8004中；首先将接合子在含10μg/ml卡那霉素和25μg/ml利福平的平板上进行一次筛选，所得阳性克隆再转入含25μg/ml利福平和5％蔗糖平板上进行二次筛选，得到成功敲除了XC_2460基因的黄单胞菌突变体菌株，命名为XC2460。

3.根据权利要求2所述的黄单胞菌突变体的构建方法，其特征在于：所述XC2460-U-F的序列为：GTAGGAATTCgtgggtttggcgacgttggat；

XC2460-U-R的序列为：Aacacgccgatcagggtcag；

XC_2460-D-F的序列为：

GGACCAGACCCTGGCACTGACCCTGATCGGCGTGTTttaccctggatttctacgccaagttc；

XC2460-D-R的序列为：GTAGAAGCTTttaccagaacaccgcgtacag。

4.根据权利要求1所述的黄单胞菌突变体在纤维素生物转化中的应用。

5.根据权利要求4所述的黄单胞菌突变体在纤维素生物转化中的应用，其特征在于：通过限制黄单胞菌的葡萄糖转运系统来提高其在纤维素生物转化过程中胞外葡萄糖的累积量，葡萄糖作为纤维素生物转化过程中的中间产物，其向胞内的转运量下降，实现了其在胞外的大量积累，提高了胞外的葡萄糖浓度，有利于后续的进一步转化。