[发明专利]一种从茶渣中同步制备多种活性物质的方法

权利要求书

1.一种从茶渣中同步制备多种活性物质的方法，包括： 

(1)除杂蛋白步骤；取茶叶生产过程中所废弃的茶渣，70～100℃水提取2～4次，所加水的体积与茶渣的质量比为5∶1～15∶1(V/W)，合并提取液后过滤，滤液加入蛋白沉淀剂，沉淀反应去除杂蛋白，离心去除沉淀后得到茶渣去蛋白提取液； 

(2)多糖沉淀步骤；将步骤(1)得到的茶渣去蛋白提取液，加入多糖沉淀剂，调整pH6.0～9.0，反应4～12小时后，离心分别得到沉淀及上清液，所得沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚搅拌洗涤沉淀后，干燥得到茶多糖；所得的上清液，减压浓缩至干，得到茶渣去多糖提取物； 

(3)第一次硅胶干柱分离步骤；将步骤(2)得到的茶渣去多糖提取物，上样于硅胶干柱上，茶渣去多糖提取物与硅胶基填料的质量比为1/80～1/300，在常压下利用压力差以展开剂下行展开，分别获得咖啡碱与茶多酚；展开剂为甲醇与正己烷的混合液或者甲醇与乙酸乙酯的混合液； 

(4)第二次硅胶干柱分离步骤；将步骤(3)得到的茶多酚，上样于硅胶干柱上，茶多酚与硅胶基填料的质量比为1/50～1/200，在常压下利用压力差以展开剂下行展开，分别获得纯度大于95％的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)；展开剂为无水乙醇与正己烷的混合液或者无水乙醇与丙酮的混合液。 

2.如权利要求1所述的一种从茶渣中同步制备多种活性物质的方法，其特征在于：所述除杂蛋白步骤中，所述蛋白沉淀剂为：三氟三氯乙烷或2～5％的三氯醋酸水溶液(V/V)；所述沉淀反应去除杂蛋白，其过程为：在滤液中加入三氟三氯乙烷，加入三氟三氯乙烷与滤液体积比为1∶2～2∶1(V/V)，搅拌反应10～20min，离心去除沉淀后，取水层得到茶渣去蛋白提取液液；或在滤液中滴加2～5％的三氯醋酸水溶液，加入三氯醋酸水溶液与滤液体积比为1∶10～1∶20(V/V)，5～10℃静置8～16小 时，离心去除沉淀后得到茶渣去蛋白提取液。 

3.如权利要求1所述的一种从茶渣中同步制备多种活性物质的方法，其特征在于：所述多糖沉淀步骤中，所述多糖沉淀剂为：0.05g/ml氢氧化十六烷基三甲胺溴化物(CTA-OH)水溶液、0.05g/ml十六烷基吡啶(CP-OH)水溶液中的一种，多糖沉淀剂与茶渣去蛋白提取液的体积比为0.05∶1～0.2∶1(V/V)。 

4.如权利要求1所述的一种从茶渣中同步制备多种活性物质的方法，其特征在于：所述第一次硅胶干柱分离步骤与第二次硅胶干柱分离步骤中： 

所述硅胶干柱为填装有硅胶基填料、高径比5∶1～20∶1的分离柱装置，硅胶基填料由硅胶和硅藻土组成，硅藻土与硅胶基填料的质量百分比为5％～20％；硅胶粒径为30μm～80μm，硅胶活性为II～III级；所述硅胶干柱的填装过程与一般柱分离采用的干法装柱的过程一致。 

5.如权利要求1所述的一种从茶渣中同步制备多种活性物质的方法，其特征在于：所述第一次硅胶干柱分离步骤中： 

所述展开剂的体积比为：甲醇∶正己烷＝1∶2～5∶1(V/V)，或者甲醇∶乙酸乙酯＝1∶3～4∶1(V/V)； 

所述下行展开的过程为：上样后，将展开剂从硅胶干柱顶加入，在常压下利用压力差下行展开，当展开剂流至硅胶干柱底部时，停止展层；将分别富含咖啡碱与茶多酚的硅胶基填料从硅胶干柱中刮出后，加入95％乙醇，于摇床上振荡洗脱10～20分钟或超声洗脱5～15分钟，重复洗脱2～4次，将所获的洗脱液减压蒸干，即分别得到咖啡碱与茶多酚；所述分别富含咖啡碱与茶多酚的硅胶基填料，其在硅胶干柱中所处的位置是参照相同展开剂条件下硅胶薄层实验得到的目标产物比移值R_f确定。 

6.如权利要求1所述的一种从茶渣中同步制备多种活性物质的方法，其特征在 于：所述第二次硅胶干柱分离步骤中： 

所述展开剂的体积比为：无水乙醇∶正己烷＝8∶1～95∶5(V/V)，或者无水乙醇∶丙酮＝7∶1～9∶1(V/V)； 

所述下行展开的过程为：上样后，将展开剂从硅胶干柱顶加入，在常压下利用压力差下行展开，当展开剂流至硅胶干柱底部时，停止展层；将分别富含EGCG、EGC、ECG的硅胶基填料从硅胶干柱中刮出后，加入95％乙醇，于摇床上振荡洗脱10～20分钟或超声洗脱5～15分钟，重复洗脱2～4次，将所获的洗脱液减压蒸干，即分别 

得到纯度大于95％的EGCG、EGC、ECG；所述分别富含EGCG、EGC、ECG的硅胶基填料，其在硅胶干柱中所处的位置是参照相同展开剂条件下硅胶薄层实验得到的目标产物比移值R_f确定。