[发明专利]一种凝结芽孢杆菌的固体发酵方法

说明书

技术领域

 本发明涉及饲用微生物领域，尤其涉及一种凝结芽孢杆菌的固体发酵方法。

背景技术

芽孢杆菌类微生物添加剂是利用正常微生物群成员中的有益芽孢杆菌制成的一种活菌制剂，具有天然耐高温和耐酸碱等优点。凝结芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是嗜温型的好氧产芽孢的杆状细菌，在自然界中广泛存在，对人畜无毒无害，不污染环境，可形成芽孢的革兰氏阳性菌，是国内外公认可在饲料中直接添加使用的益生菌。

凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)又称乳酸芽孢杆菌，既能产生乳酸、又能形成芽孢，是一种具有很大应用潜力的菌株。

目前，凝结芽孢杆菌产品在动物饲料中的研究和应用还处于初级阶段。在工业化生产中，仍然存在发酵周期长、芽孢形成率低、成本高等问题。所以需要对凝结芽孢杆菌发酵培养基及发酵条件进行研究，以期提高凝结芽孢杆菌的产量并降低生产成本。

凝结芽孢杆菌的研究、生产等主要以液体发酵为主，为解决液体发酵产生大量废弃液、造成环境污染和后续应用生产工序复杂等问题，针对具有抗病促生作用的凝结芽孢杆菌的固体发酵进行研究，为凝结芽孢杆菌的畜牧行业应用提供基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种凝结芽孢杆菌的固体发酵方法，以克服现有的凝结芽孢杆菌的固体发酵方法存在的发酵周期长、芽孢形成率低和成本高等问题。

实现本发明目的的技术方案如下：

一种凝结芽孢杆菌的固体发酵方法，包括以下步骤：

（1）将凝结芽孢杆菌置于种子培养液中进行复苏传代，制得种子菌液；

（2）将步骤（1）制得的种子菌液接种于灭菌的固体培养基中进行发酵培养，制得发酵菌体；

（3）将步骤（2）制得的发酵产物经60℃真空干燥，制得凝结芽孢杆菌发酵成品。

进一步的，所述凝结芽孢杆菌制剂中的活菌含量为1×1010cfu/g～1×1011cfu/g。

优选的，所述步骤（1）中的种子菌液的制备方法为：取活化的保存菌种于盛有200mL液体种子培养基的培养瓶中，接种量为4%（V/V），混合均匀，30℃，200r/min 培养24h；所述液体种子培养基包括：蛋白胨5g、牛肉膏3g、NaCl5g和水1L；所述液体种子培养基的pH 值为7.0～7.2。

优选的，所述步骤（2）中的发酵菌体的制备方法为：取种子菌液保存于固体培养基中，接种量10%（V/V），混合均匀，30℃，培养24h；所述固体培养基包括：麸皮：玉米=1：2，含水量为70%，水中添加6%葡萄糖、4%牛肉膏和0.1%硫酸锰；所述固体培养基的pH值为7.5。

本发明有益效果：（1）本发明所提供的凝结芽孢杆菌的固体发酵方法，发酵时间为24h，节约了发酵时间，缩短了发酵周期；（2）本发明所提供的凝结芽孢杆菌的固体发酵方法，菌体浓度大，芽孢形成率高；（3）本发明所提供的凝结芽孢杆菌的固体发酵方法，采用常见的发酵基质，不造成废液和环境污染，成本廉价。

具体实施方式

实施例1

将凝结芽孢杆菌置于种子培养液中进行复苏传代，制得种子菌液。按如下配方配制液体种子培养基：蛋白胨5g、牛肉膏3g、NaCl5g、水1L，调pH值7.0～7.2。所配上述液体种子培养基经121℃、高压蒸汽灭菌20min。取活化的保存菌种于盛有200mL液体种子培养基的1L培养瓶中，接种量4%（V/V），混合均匀，置于恒温摇床内，在30℃、200r/min 下培养18h。

实施例2

将实施例1中制得的种子菌液接种于固体发酵培养液中进行培养，制得固体发酵产物。按如下配方配制固体发酵培养基：麸皮：玉米=1：2，加水使其含水量为70%，浸泡2h，水中添加6%葡萄糖、4%牛肉膏和0.1%硫酸锰，调节pH值为7.5，在121℃下高压蒸汽灭菌20min 。将实施例1中制得的种子菌液接种于固体发酵培养液中，接种量为10%（V/V），30℃培养24h。

实施例3

将实施例2中发酵获得产物放进60℃真空干燥箱，进行真空干燥，制得凝结芽孢杆菌发酵成品，经过倍数稀释后，划平板计数，所述凝结芽孢杆菌制剂中的活菌含量为1×1010cfu/g～1×1011cfu/g。

本发明不局限于上述最佳实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品，但不论在其形状或结构上作任何变化，凡是具有与本申请相同或相近似的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。