[发明专利]诱导肿瘤特异性免疫的疫苗及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤治疗及预防领域，特别是涉及一种由两种病毒载体组成的疫苗及其在治疗肿瘤上的应用。

背景技术

当今，肿瘤已成为威胁人类健康的重大疾病，每年世界上约有一千万新发肿瘤病人，尽管我们对肿瘤发生、发展和转移的分子机理有了较深的理解，肿瘤外科治疗、化疗、放疗、靶向治疗及其他治疗方法也取得较大进展，但是对多数实体肿瘤，其整体生存率几十年来并无显著提高。因此，需要开发新的方法来治疗肿瘤和防止治疗后的肿瘤复发。

肿瘤免疫治疗是一种具有潜能的肿瘤治疗方法，因免疫治疗发挥抗肿瘤作用的机制与常规的化、放疗和靶向治疗截然不同。免疫治疗从全身系统来治疗肿瘤，不会有交叉抵抗，更为重要的是，发挥抗肿瘤作用的T细胞和B细胞能特异地识别肿瘤细胞和正常细胞之间微小差异的肿瘤相关抗原，能提供特异杀伤作用，但所引起的毒性非常低。在所有的肿瘤免疫治疗中，细胞毒性T细胞(Cytotoxic T Lymphocytes，CTL) 所介导的肿瘤免疫在抗肿瘤中发挥着最为重要的作用。但是，在肿瘤发生过中机体自然的抗肿瘤T细胞免疫反应被严重削弱，不能阻止肿瘤的发生发展。为此，通过激活肿瘤靶向性的CTL肿瘤疫苗对肿瘤治疗和防止肿瘤复发是具有很大潜力的肿瘤治疗方法。

肿瘤疫苗根据应用目的可分为治疗性疫苗和预防性疫苗。前者针对已发癌症病人，后者针对正常人群和高危人群的预防。肿瘤疫苗根据方法不同大致包括六大类别：蛋白抗原/佐剂疫苗、DNA 疫苗、病毒载体为基础的疫苗、肿瘤细胞疫苗、树突状细胞疫苗和独特抗体疫苗。以上这些疫苗在临床中的应用潜能多数已被检测，尽管临床前和早期临床实验显示以上各种方法能产生肿瘤特异免疫反应，但在大样本临床实验中，目前未有任何肿瘤疫苗显示足够强大的抗肿瘤效果。 

以病毒载体为基础的疫苗已显示许多优越性，如成本低、有效、安全，能方便地使用更多人群，该类疫苗已在人感染性疾病和肿瘤治疗中显示出其潜能。过去二十多年的研究表明，使用不同载体进行激发、增强（prime-boost) 方案是诱导机体特异免疫反应的最有效方法。临床前和早期临床实验结果显示，序贯使用表达肿瘤相关抗原如CEA、MUC1及免疫共刺激分子的痘苗病毒载体和禽痘病毒载体能产生较强的肿瘤特异T细胞免疫反应。但是这种异原性的激发、增强疫苗方法在大样品三期临床实验中并没有显示出显著效果。因此，需要深入研究肿瘤抗原、载体和机体免疫反应之间的相互作用，从而研制新的肿瘤疫苗。

复制选择性溶肿瘤病毒是一种新的治疗肿瘤方法。在2005年，具有E1B-55K基因缺失的腺病毒（H101，上海三维生物技术有限公司）作为世界上第一个与化疗药物联合治疗头颈部肿瘤的药物被批准。尽管其在临床上较为安全，但溶肿瘤腺病毒作为单一制剂的药效尚有限，因而更进一步开发更加有效的病毒来治疗肿瘤显得十分迫切。

痘苗病毒（Vaccinia virus，VV）的许多内在优点使得其非常适合作为溶肿瘤制剂治疗肿瘤。近几年来，我们对溶肿瘤痘苗病毒作为治疗人类肿瘤的药物进行了全面研究，发现作为预防天花的痘苗病毒VVLister株在体外具有杀伤肿瘤的特性，尤其是对溶肿瘤腺病毒不敏感的肿瘤，痘苗病毒在体内也显示出强大的抗肿瘤效果。由于单独利用复制选择性溶肿瘤病毒的安全性好，但是其临床效果较差，改善这些溶肿瘤病毒的治疗效果已迫在眉睫。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种按照特定顺序序贯使用的包含腺病毒和痘苗病毒的疫苗，该疫苗能诱导肿瘤产生特异性免疫，可用于治疗肿瘤和防止肿瘤的复发。

本发明的技术方案：

一种诱导肿瘤特异性免疫的疫苗，所述疫苗包括溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒，两种病毒按先后序贯使用。

所述溶肿瘤腺病毒为复制性腺病毒，痘苗病毒为用于天花疫苗的痘苗病毒。

所述溶肿瘤腺病毒为复制性人5型腺病毒，痘苗病毒为用于天花疫苗的李斯特株痘苗病毒。

所述溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒是经过如下改造得到的：将溶肿瘤腺病毒中的E1ACR2、E1B19k、E3gp19K基因中的一个或多个删除，或将VAI RNA病毒基因删除；或将痘苗病毒中的TK基因和/或N1L基因删除。 

所述溶肿瘤腺病毒和痘苗病毒通过表达肿瘤相关抗原、免疫调节基因和/或免疫调节蛋白的抗体，以增强疫苗效果。 

所述免疫调节基因为GM-CSF、Flt3L、IL7、IL12、41BBL、CCL21、IL24、IL2、IL15、IL15受体、IL21和IL23中的一种。