[发明专利]一种云芝糖肽及其脂质体

说明书

技术领域

本发明属于天然药物有效成分提取及应用技术领域，涉及一种云芝糖肽及其脂质体，同时还涉及该云芝糖肽的提取、纯化方法及云芝糖肽脂质体的制备方法。 

背景技术

从云芝深层发酵获得的云芝多糖（PSK）是日本公司开发的一种抗恶性肿瘤的药物（商品名：Krestin），用于治疗乙型肝炎、迁徙性肝炎、慢性活动性肝炎等，并适用于肝癌的预防与治疗。另一个从云芝深层发酵获得的云芝糖肽（PSP）能抑制人肺癌、胃癌、白血病、淋巴癌细胞及腹水癌等多种癌细胞的增生；并能显著提高负瘤者饮食，缓解疼痛，提高耐缺氧能力；消除因化疗或者放疗引起的白血球降低作用，提高机体IgG含量和吞噬指数等。 

上市的云芝糖肽或者云芝多糖制剂，目前其原料药的生产工艺流程为：水提、浓缩、醇沉或不醇沉、离心、烘干。这种传统的多糖生产工艺存在能耗高、由于热浓缩、高温干燥产生的梅拉德反应导致多糖颜色深、多糖水溶性差、多糖生物活性低，或者消耗大量酒精增加成本、增加生产的不安全性，以及多糖含量低等缺陷。 

发明内容

本发明的目的是克服上述不足之处提供一种云芝多糖含量达到80%以上，颜色浅，水溶性好，尽可能的保留生物活性的云芝糖肽。 

本发明的另一目的是提供利用上述云芝糖肽制备得到云芝糖肽脂质体，该云芝糖肽脂质体使得云芝糖肽在体内能够被更好的吸收利用，并且通过脂质体的缓释作用，使药物在体内有效血药浓度维持较长时间。 

本发明的目的是通过以下方式实现的： 

一种云芝糖肽，其特征在于该云芝糖肽是经过以下步骤制备得到的： 

1)云芝菌丝体经粉碎后，在95～100℃条件下保温4～5小时制备得到云芝水提液； 

2)将云芝水提液通过截留分子量为40万～45万道尔顿的陶瓷膜微滤，得到微滤液；微滤采用的工作温度为40℃～50℃，工作压力：进压为3.0～8.0bar，出压为1.0～5.0bar； 

3)上述微滤液按照1～2:1的比例加入体积比为4：1的氯仿：正丁醇混合液，振摇，离心， 取上层液，重复10～15次，40℃减压除去有机溶剂，分离纯化，得到纯化后的云芝水提液； 

4)上述纯化后的云芝水提液浓缩至50℃下相对密度为1.10～1.15，加入浓缩液2～4倍体积浓度为95%的乙醇，醇沉6～8h，离心，收集并干燥醇沉物，即得云芝糖肽。 

优选步骤“2）”所述的微滤膜截留分子量为45万道尔顿，微滤的工作温度为40℃～45℃，工作压力：进压为4.0bar，出压为3.0bar。 

步骤“3）”中所述的分离纯化优选采用模拟移动床色谱分离系统进行连续分离纯化，采用“4-7-2-7根”色谱柱的分配方式进行分离纯化，柱内装入分离用的树脂AB-8型大孔吸附树脂。 

在所述的模拟移动床色谱分离系统进行四区循环分离时，采用进料流速为50ml～150ml/min，交换水洗流速为30ml～100ml/min；顶水流速为20ml～100ml/min；产品出口流速为55ml～160ml/min；循环泵流速为100ml～300ml/min。 

还可以设置再生水洗流速为30ml～100ml/min；再生剂流速为30ml～50ml/min；再生剂为浓度为5%的氢氧化钠溶液。 

本发明优选进料流速为120ml/min，交换水洗流速为50ml/min；顶水流速为20ml/min；再生水洗流速为100ml/min；再生剂氢氧化钠溶液流速为30ml/min；再生剂浓度为5%；产品出口流速为150ml/min；循环泵流速为100mlml/min。 

步骤“4）”所述的干燥优选为冷冻干燥，条件为温度为30℃，压力为80Pa，物料厚度3～10mm，优选物料厚度5mm。 

本发明所述的云芝糖肽作为活性成分可与磷脂及胆固醇制备云芝糖肽脂质体，该脂质体由以下重量份的原料制成：磷脂10～40重量份，胆固醇1～20重量份，云芝糖肽35～45重量份。优选脂质体由以下重量份的原料制成：磷脂15～30重量份，胆固醇10～20重量份，云芝糖肽35～40重量份。最优选脂质体由以下重量份的原料制成：磷脂25重量份，胆固醇15重量份，云芝糖肽40重量份。其中，所述的磷脂可为卵磷脂、脑磷脂或大豆磷脂，优选大豆磷脂。