[发明专利]一种石油降解菌的固定化方法与应用

权利要求书

1.一种石油降解菌的固定化方法，包括以下内容：以小麦秸秆、玉米秸秆、麦麸、树叶、核桃壳质活性炭为载体材料，混合后进行预处理；接入活化好的石油降解菌种子液，进行吸附培养；在无菌条件下滤掉上层菌悬液，用无菌水冲洗载体材料，将吸附菌后的载体材料转移到新的石油降解菌种子液中，重复多次使载体材料吸附的菌量达到饱和，即得所需固定化石油降解菌。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：以25wt%～50wt%的小麦秸秆、20wt%～30wt%的玉米秸秆、5wt%～20wt%麦麸、5wt%～20wt%树叶、10wt%～25wt%的核桃壳质活性炭为载体材料。

3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：以35wt%～50wt%的小麦秸秆，20wt%～25wt%的玉米秸秆，5wt%～10wt%的麦麸，10wt%～15wt%的树叶，12.5wt%～20wt%的核桃壳质活性炭为载体材料。

4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的树叶为梧桐树叶。

5.按照权利要求1或4所述的方法，其特征在于：小麦秸秆、玉米秸秆和树叶晒干、粉碎，过24目筛。

6.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：核桃壳质活性炭采用ZnCl₂活化法制备，具体为：称取一定量的粉碎过24目筛的核桃壳浸渍于50wt%的ZnCl₂溶液中，料液比为2:3，搅拌2小时后静置24 h，干燥后放入管式加热炉中，于300℃、N₂的氛围下炭化80min，所得炭化样品再在50wt%ZnCl₂溶液中浸渍20min，经抽滤、干燥后置于马弗炉中于500℃下活化40 min，冷却后将活化产物用20wt%的盐酸溶液煮沸20min，再用去离子水将所得产物洗涤至中性，置于干燥箱中于120 ℃烘干。

7.按照权利要求6所述的方法，其特征在于：制备的核桃壳质活性炭的比表面积为960m²/g，碘吸附值为820mg/g。

8.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：载体的预处理是用蒸馏水浸泡12～24h，调节pH7.0～7.5，滤去上层漂浮的杂质和上清液，50℃烘24h，高压灭菌。

9.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：石油降解菌种子液的制备采用牛肉膏蛋白胨液体培养基，配方为：NaCl 10g/L，蛋白胨 10g/L，牛肉膏 5g/L和一定体积的蒸馏水加热混合均匀，冷却后用NaOH或盐酸调节pH7.0～7.2，121 ℃水蒸气灭菌20 min。

10.按照权利要求1或9所述的方法，其特征在于：石油降解菌种子液是在120r/min、30℃条件下培养至对数生长期与稳定期的交界点，保证石油降解菌的数量达到1×10¹⁰～5×10¹⁰个/mL。

11.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：将石油降解菌种子液与载体材料混合，载体材料占石油降解菌种子液的5v%～20v%。

12.按照权利要求1或11所述的方法，其特征在于：在120～160r/min、30℃条件下培养16～24h，用无菌水缓缓冲洗吸附石油降解菌后的载体材料，去掉未吸附上的石油降解菌，将所述吸附菌后的载体材料转移到新的石油降解菌种子液中，重复多次使载体材料吸附固定的菌量达到饱和。

13.权利要求1至12任一所述的固定化石油降解菌的应用，其特征在于：固定化石油降解菌的具体使用方式为：保持土壤25wt%～30wt%的水分含量，以播种的方式按每平方米土壤撒0.1～1kg固定化石油降解菌成品，并对表层0～30cm土壤进行翻耕，使之与固定化石油降解菌成品混合均匀，并保证土壤良好的通气性。