[发明专利]一种测定人血液中甘胆酸的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种免疫检测试剂盒，特别涉及一种测定人血液中甘胆酸的试剂盒。

背景技术

甘胆酸（cholyglycine,CG）是胆酸和甘氨酸结合而成的结合胆酸。是主要胆酸之一，胆酸（CA）和鹅去氧胆酸（CDCA）总称胆汁酸。肝损伤的生化指标中CG比谷丙转氨酶，胆红素等试验更敏感。急性肝炎，慢性活动性肝炎，原发性肝癌，肝硬化及慢性迁延性肝炎，血清CG的水平均高于正常对照组，升高阳性率按上述顺序递减。尤其在临床鉴别慢性活动性肝炎和慢性迁延性肝炎方面，CG可做为一项有价值的指标，慢活肝CG升高的幅度和频率均高于慢迁肝。对判断慢性活动性肝炎的进展和缓解，预测疗效和复发均有很好价值。

目前现有的测定方法有：

1、Elisa测定方法：该方法一般用于半定量的测定，测定准确度、灵敏度、精密度较差，而且操作比较繁琐，不利于在临床中广泛应用。

2、化学发光测定方法：该方法灵敏度较高，但是测定准确度和试剂稳定性较差，而且需要专用的化学发光测定设备，测定速度较慢，临床应用局限性明显。

3、放射免疫测定方法：该方法因为试剂有放射性污染和试剂有效期短暂（半衰期）等缺陷已经被淘汰。

目前我国市场上适合临床的甘胆酸测定试剂盒短缺，尤其缺乏能准确、简便、快速测定、 又能进行大批量标本同时测定的试剂。

发明内容

本发明的目的在于一种测定人血液中甘胆酸的试剂盒，检测操作简便、快速，可以同时进行大批量样本快速测定，检测的准确度、灵敏度好。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是： 

一种测定人血液中甘胆酸的试剂盒，所述试剂盒包括试剂A、试剂B及已知浓度的甘胆酸校准品，其中，试剂A与试剂B质量比为1-5 : 1；

所述试剂A的各组分及其含量为：微生物抑制剂0.001-1.1g/L，EDTA  0.05- 5.0 g/L，甘油0.1-10.0 g/L，牛血清白蛋白0.1-5.0g/L，表面活性剂0.01-3.0g/L，反应增强剂0.5-5.0g/L，氯化钠0.1-8.0g/L，pH 6-8 的Good’s缓冲液25-100mmol/L；Good’s缓冲液又称两性离子缓冲液。

所述试剂B的各组分及其含量为：微生物抑制剂0.001-1.1g/L，EDTA  0.05- 5.0 g/L，甘油0.1-10.0 g/L，牛血清白蛋白0.1-5.0g/L，表面活性剂0.01-3.0g/L，反应增强剂0.5-5.0g/L，氯化钠0.1-8.0g/L，pH 6-8的Good’s缓冲液25-100mmol/L，与甘胆酸单克隆抗体交联的纳米微球粒径50-100nm 的为0.1-0.5 g/L，与甘胆酸单克隆抗体交联的纳米微球粒径150-250nm 的为0.1-0.5 g/L。

本发明的检测原理为胶乳增强免疫比浊法，具体为：试剂A中加入人血清样本，试剂A作为缓冲系统使用，然后加入试剂B，试剂B中与甘胆酸单克隆抗体交联的纳米微球上的甘胆酸单克隆抗体人血清样本中甘胆酸特异性结合形成可溶性抗原抗体复合物，形成的浊度和样本中甘胆酸的含量成正相关关系。

与甘胆酸单克隆抗体交联的纳米微球分为小粒径微球（50-100nm）和大粒径微球（150-250nm）两部分，小粒径微球比表面积大，交联的甘胆酸单克隆抗体较多，增加了检测的线性范围。大粒径微球颗粒较大，结合甘胆酸后容易显现浊度，提高了检测的灵敏度。控制与甘胆酸单克隆抗体交联的纳米微球的含量异常重要，对于检测起到了核心作用。作为优选，大粒径微球（150-250nm）的浓度为小粒径微球（50-100nm）浓度的2-5倍，这样检测效果最佳。

作为优选，所述已知浓度的甘胆酸校准品的各组分及其含量为：pH 6-8的Good’s缓冲液25-100mmol/L，根据需要的校准品浓度添加的相应量的甘胆酸纯品。

作为优选，所述的微生物抑制剂选自叠氮钠、ProClin 200、ProClin 300 中的一种。 

作为优选，所述的表面活性剂选自Tween20、Tween30、Tween80、Triton X-100中的一种。

作为优选，所述的反应增强剂选自聚乙二醇 2000、 聚乙二醇 4000、聚乙二醇 8000、聚乙二醇 20000中的一种。

作为优选，所述Good’s缓冲液选自磷酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸缓冲液中的一种。