[发明专利]鲑亚科鱼类特异性鉴定方法及其试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学和核酸检测技术领域。具体地，本发明涉及鲑亚科鱼类特异性鉴定方法及其试剂盒。

背景技术

鲑科(Salmonidae)鱼类属典型冷水鱼类，隶属于硬骨鱼纲，鲑形目，是世界三大养殖鱼类之一。鲑科鱼含有丰富的蛋白质、脂肪和维生素，胆固醇含量很低，而且含有ω3脂肪酸(EPA、DHA和DPA)，肉质鲜美，营养价值极高，深受消费者青睐。一般将鲑科分为三个亚科，包括鲑亚科(Salmoniae)，白鲑亚科(Coregoninae)和茴鱼亚科(Thymallidae)。其中鲑亚科鱼类有5属，即大马哈鱼属(Oncorhynchus)、红点鲑属(Salvelinus)、哲罗鲑属(Hucho taimen)、细鳞鲑属(Brachymystax)和鲑属(Salmo)，囊括了鲑科中多数的食用性鱼类，因此需求最大，经济价值最高，市场上常见的以“三文鱼”为商品名的鲑鳟鱼类，如大西洋鲑、虹鳟、大麻哈鱼，以及哲罗鲑、红点鲑、细鳞大麻哈鱼等均属于鲑亚科鱼类。至2009年世界三文鱼产量达到366.4万吨，我国三文鱼进口量达到了22万吨，消费需求日益增长。但是目前国内外市场上“三文鱼”商品名称混乱，尤其是很多国家食品监管部门在市场上发现近缘鱼种假冒替代现象时有发生，仅美国在2002年就有34%水产品乱贴标签或假冒其它种类产品。为保证保费者权益，规范三文鱼销售市场，使产品“名副其实”，建立一种鲑亚科鱼类的鉴定方法尤为重要。

由于经济利益驱动，一些不法商在食品的加工过程中，常常以价格低廉的原料替代或掺入高价格的原料，或者根本就不添加标注的原料成分。在加工产品的造假掺假过程中，经常会使用有毒有害物质(如染色馒头等)，危害人民身体健康。本发明旨在开发出方便快捷地检测食品、饲料及鱼类加工制品中鲑亚科鱼成分的方法，确保食品质量安全。

发明内容

本发明的目的在于提供鲑亚科鱼类特异性鉴定方法及其试剂盒。

在本发明的第一方面，提供一种鉴定鲑亚科鱼类的方法，所述方法包括：

以待测样品的DNA为模板，以SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物进行PCR扩增；若发生特异性扩增，则表明待测样品中包含鲑亚科鱼类。

在一个优选例中，以SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物以及SEQID NO:3所示的荧光探针(如Taqman探针)进行实时荧光PCR检测。

在另一优选例中，所述的待测样品是食品或饲料。

在另一优选例中，所述方法的检测灵敏度为0.01%。

在本发明的第一方面，提供一种引物，所述引物是引物对，其序列如SEQID NO:1和SEQ ID NO:2所示。

在本发明的第一方面，提供一种荧光探针，所述的探针序列如SEQ ID NO:3所示。

在本发明的第一方面，提供所述的引物或所述的荧光探针的用途，用于从待测样品中鉴定鲑亚科鱼类。

在本发明的第一方面，提供一种鉴定鲑亚科鱼类的试剂盒，其中包括所述的引物；和/或所述的荧光探针。

在一个优选例中，所述试剂盒中还包括：含有鲑亚科鱼类的DNA的检测标准品。

在另一优选例中，所述试剂盒中还包括选自以下的试剂：DNA提取试剂，Taq酶，PCR缓冲液，DNA聚合酶，和/或说明鉴定鲑亚科鱼类的方法的使用说明书。

本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

附图说明

图1、应用实时荧光PCR检测方法来进行特异性实验的荧光PCR检测图谱。

图2、鲑亚科鱼的PCR扩增结果以及标准曲线。其中，A为虹鳟(Oncorhynchus mykiss)，B为白点鲑(Salvelinus leucomaenis)，C为尖吻细鳞鲑(Brachymystax lenok)，D为大西洋鲑(Salmo salar)。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入的研究和试验，首次揭示一种可特异性鉴定鲑亚科鱼类的引物，所述引物对含有鲑亚科鱼类DNA的样品可发生特异性扩增(获得阳性结果)，而对没有鲑亚科鱼类DNA的样品不发生特异性扩增(获得阴性结果)。为了简化PCR扩增方法，本发明人还设计了配合所述引物的、用于进行实时荧光PCR的荧光探针。采用所述的引物配合荧光探针，可良好地应用于鉴定鲑亚科鱼类，并且具有良好的再现性、灵敏度。