[发明专利]利用单管巢式实时聚合酶链反应(PCR)的改良结核菌诊断方法

权利要求书

1.一种引物组，其特征在于，所述引物组由序号1-4，序号6-9及序号12-15的引物构成。

2.一种结核菌检测试剂盒，其特征在于，所述结核菌检测试剂盒包括权利要求1中所述的引物组。

3.根据权利要求2所述的结核菌检测试剂盒，其特征在于，还包括探针。

4.根据权利要求3所述的结核菌检测试剂盒，其特征在于，所述探针选自由序号5、序号10-11及序号16构成的群。

5.根据权利要求3所述的结核菌检测试剂盒，其特征在于，所述探针的5'端和3'端标有荧光剂。

6.根据权利要求5所述的结核菌检测试剂盒，其特征在于，所述5'端标有的荧光剂是选于由6-羧基荧光素、六氯乙烷-6-羧基荧光素、四氯-6-羧基荧光素及花青素5构成的群，所述3'端标有的荧光剂是6-羧甲基-若丹明或BHQ(black hole quencher)-1，2，3(BHQ-1，2，3)。

7.根据权利要求2所述的结核菌检测试剂盒，其特征在于，所述结核菌选于由Mycobacterium tuberculosis、M.bovis、M.africanum、M.canetii及M.microti构成的群。

8.一种结核菌检测方法，其特征在于，包括从样品中抽取DNA，针对所述DNA进行实时定量PCR，将序号1-2、序号6-7及序号12-13的第一引物和序号3-4、序号8-9及序号14-15的第二引物与所述DNA放入同一管内，进行增幅的阶段。

9.根据权利要求8所述的结核菌检测方法，其特征在于，所述管还包括探针。

10.根据权利要求9所述的结核菌检测方法，其特征在于，所述探针选自由序号5、序号10-11及序号16构成的群。

11.根据权利要求9所述的结核菌检测方法，其特征在于，所述探针的5'端和3'端标有荧光剂。

12.根据权利要求8所述的结核菌检测方法，其特征在于，所述结核菌选于由Mycobacterium tuberculosis、M.bovis、M.africanum、M.canetii及M.microti构成的群。

13.根据权利要求8所述的结核菌检测方法，其特征在于，所述第一引物及所述第二引物的浓度为10pg。

14.根据权利要求8所述的结核菌检测方法，其特征在于，所述样品为咳痰、小便或肿瘤组织。

15.一种定量方法，其特征在于，所述遗传基因定量方法包括以下阶段：

a.在存在于单管的序号1-4、序号6-9及序号12-15的引物组成物中，混合自试料抽取出的菌的DNA，准备遗传基因分析试料的阶段；

b.在所述a阶段的遗传基因分析试料中，进行实时巢式PCR，获取PCR产物的阶段；

c．对所述b阶段的PCR产物进行定量，获取定量曲线的阶段；及

d.利用所述定量曲线，对存在自试料抽取的菌的DNA的rpoB及IS6110遗传基因特异遗传基因定量的阶段。

16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述方法还包括选自管内序号5、序号10-11及序号16构成群的探针。

17.一种改善结核菌敏感性及特异性方法，其特征在于，所述改善结核菌敏感性及特异性方法是在利用巢式实时PCR检测结核菌的方法中，将序号1-2、序号6-7及序号12-13的第一引物和序号3-4、序号8-9及序号14-15的第二引物放入同一管内，进行增幅，对选自Mycobacterium tuberculosis、M.bovis、M.africanum、M.canetii及M.microti构成群的结核菌的敏感性和特异性进行改善的方法。

18.一种试剂盒的结核菌检测用途，其特征在于，所述试剂盒的结核菌检测用途包括由序号1-4、序号6-9及序号12-15的引物构成的引物组。