[发明专利]在蛋白质纯化过程中降低样品中的一种或多种杂质水平的方法

权利要求书

1.用于从蛋白A洗出液中纯化靶分子的流通方法，其包括下述步骤：

(i)使回收自蛋白A色谱柱的所述洗出液与活性碳接触；

(ii)使来自步骤(i)的流通样品与阴离子交换色谱介质接触；

(iii)使来自步骤(ii)的流通样品与阳离子交换色谱介质接触；以及

(iv)得到来自步骤(iii)的包含所述靶分子的流通样品，其中所述洗出液连续流经步骤(i)-(iii)，并且其中步骤(iii)之后的所述流通样品中的一种或多种杂质的水平低于其在步骤(i)中所述洗出液中的水平。

2.权利要求1的流通方法，其还包括对来自步骤(iii)的所述流通样品进行病毒过滤。

3.权利要求1的流通方法，其还包括在步骤(ii)和步骤(iii)之间使用在线静态混合器和/或缓冲罐来改变pH。

4.权利要求1的流通方法，其中所述方法使用单个制动器。

5.权利要求1的流通方法，其中来自所述蛋白A色谱柱的所述洗出液在与活性碳接触前经过病毒灭活。

6.权利要求1的方法，其中步骤(i)-(iii)可以任意顺序进行。

7.用于从蛋白A洗出液中纯化靶分子的流通纯化方法，其包括使所述洗出液与两种或更多种选自活性碳、阴离子交换介质、阳离子交换介质和病毒过滤介质的基质接触，其中所述洗出液的流动是连续的。

8.在蛋白质纯化过程中减少一个或多个色谱柱上的负荷的方法，其中所述方法包括在包含所关注的蛋白质和一种或多种杂质的样品与一个或多个含有亲和介质、AEX介质、CEX介质、用C介质或混合模式介质的色谱柱接触之前使所述样品以流通模式与以下之一接触，从而减少所述一个或多个色谱柱上的所述负荷：

(i)含碳材料；

(ii)含碳材料和CEX介质的组合；

(iii)含碳材料和AEX介质的组合；

(iv)含碳材料和混合模式介质的组合；和

(v)含碳材料和HIC介质的组合。

9.在蛋白质纯化过程中减少一个或多个使用多孔介质的色谱步骤中的负荷的方法，其中所述方法包括在包含所关注的蛋白质和一种或多种杂质的样品与一个或多个使用多孔介质的色谱步骤接触之前使所述样品以流通模式与以下之一接触，从而减少所述一个或多个色谱步骤中的所述负荷：

(i)含碳材料；

(ii)含碳材料和CEX介质的组合；

(iii)含碳材料和AEX介质的组合；

(iv)含碳材料和混合模式介质的组合；和

(v)含碳材料和HIC介质的组合。

10.权利要求9的方法，其中所述多孔介质包括亲和介质、AEX介质、CEX介质、HIC介质或混合模式介质中的一种或多种。

11.权利要求8的方法，其中所述亲和介质选自蛋白A或蛋白G。

12.权利要求8的方法，其中所述所关注的蛋白质是抗体或其功能片段。

13.权利要求12的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。

14.权利要求12的方法，其中所述抗体是多克隆抗体。

15.权利要求8的方法，其中所述样品包含细胞培养料。

16.权利要求8的方法，其中在所述样品与(i)至(v)之一接触前，所述样品经过澄清步骤。

17.权利要求9的方法，其中所述澄清步骤包括深层过滤、筛滤、絮凝和/或离心中的一种或多种。

18.权利要求8的方法，其中所述含碳材料包括活性碳。

19.权利要求18的方法，其中所述活性碳包括活性炭。

20.权利要求8的方法，其中所述含碳材料和AEX介质的组合是活性碳和AEX树脂的混合物，所述含碳材料和CEX介质的组合是活性碳和CEX树脂的混合物，所述含碳材料和混合模式介质的组合是活性碳和混合模式树脂的混合物，并且所述含碳材料和HIC介质的组合是活性碳和HIC树脂的混合物。

21.权利要求20的方法，其中将所述混合物填充入柱。