[发明专利]血清肿瘤标志物检测的微型化磁通门生物传感器制作方法

权利要求书

1.一种血清肿瘤标志物检测的微型化磁通门生物传感器制作方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）采用MEMS工艺在玻璃基片上制作微型化磁通门传感器；

（2）在玻璃基片上溅射Cr/Au薄膜，然后甩光刻胶、曝光、显影、刻蚀Cr/Au膜、去胶，使Au膜暴露在外面；

（3）Au膜上生物敏感膜的制备：生物敏感膜为一层纳米级厚度的自组装膜，自组装膜为11-巯基十一烷酸，然后经EDC+NHS活化形成的；

（4）肿瘤标志物单克隆抗体的固定：将肿瘤标志物单克隆抗体溶液滴入Au膜上面，放入冰箱过夜；然后用PBS溶液清洗、BSA溶液封闭，最后用PBS溶液清洗、室温干燥；

（5）抗原点样：将抗原溶液滴入Au膜上面，培育，然后用PBS溶液清洗，室温下干燥；

（6）生物素化抗体固定：将生物素化抗体溶液滴入Au膜上面，室温培育，然后用PBS溶液清洗，室温下干燥；

（7）磁性标签固定：将磁性标签滴入Au膜上面，室温下培育，然后用PBS溶液清洗，室温干燥。

2.根据权利要求1所述的血清肿瘤标志物检测的微型化磁通门生物传感器制作方法，其特征在于，步骤（1）中，所述微型化磁通门传感器的磁芯为NiFe薄膜、非晶或纳米晶软磁带材材料，并采用MEMS工艺进行加工。

3.根据权利要求1所述的血清肿瘤标志物检测的微型化磁通门生物传感器制作方法，其特征在于，步骤（2）中，所述Cr/Au薄膜，其厚度为100-500nm。

4.根据权利要求1所述的血清肿瘤标志物检测的微型化磁通门生物传感器制作方法，其特征在于，步骤（3）中，所述Au膜上生物敏感膜的制备，具体如下：

●Au清洗，用1M/L NaOH水溶液清洗10分钟，1M/L HCI水溶液清洗10分钟，水、无水乙醇清洗2次，干燥，臭氧紫外杀菌；

●用10-30mM11-巯基十一烷酸无水乙醇溶液浸泡，室温3小时，无水乙醇清洗2次，N2气干燥；

●EDC+NHS活化，用PH=7.4的PBS溶液溶解EDC和NHS，其浓度分别为0.2M/L和50mM/L，然后取等体积的EDC和NHS溶液混合，室温下活化40分钟；

●用PH=7.4的PBS溶液清洗样品2-5次，室温干燥。

5.根据权利要求1所述的血清肿瘤标志物检测的微型化磁通门生物传感器制作方法，其特征在于，步骤（4），所述肿瘤标志物单克隆抗体的固定，具体如下

●肿瘤标志物单克隆抗体溶于PH=7.4的PBS溶液中，浓度在0.5-1mg/ml，用量为一次5-10ul，滴入Au膜上面，然后放入冰箱4℃过夜；或在蒸汽浴37℃下修饰30分钟，然后用PBS溶液清洗2-5次，此处PBS溶液的PH=7.4且含重量为1%的BSA；

●封闭，用100ul BSA溶液封闭，冰箱4℃放置2小时，所述BSA溶液含重量为1%的BSA、体积为0.2%的tween20；

●用PH=7.4的PBS溶液清洗2-5次，室温干燥。

6.根据权利要求1所述的血清肿瘤标志物检测的微型化磁通门生物传感器制作方法，其特征在于，步骤（5）中，所述抗原点样，具体如下：

抗原用PH=7.4的PBS溶液稀释，浓度为1-1000ng/ml，用量每次5-10ul，然后滴入Au膜上面，室温下22℃培育1小时，或在蒸汽浴37℃下培育40分钟，然后用含有重量为1%的BSA、体积为0.2%的tween20的PBS溶液清洗2次，室温下干燥。

7.根据权利要求1所述的血清肿瘤标志物检测的微型化磁通门生物传感器制作方法，其特征在于，步骤（6）中，所述生物素化抗体固定，具体如下：

生物素化抗体浓度为0.5-1mg/ml的PBS溶液，每次取5-10ul，然后滴入Au膜上面，室温22℃下培育1小时，然后用PBS溶液清洗5次，室温下干燥。

8.根据权利要求1所述的血清肿瘤标志物检测的微型化磁通门生物传感器制作方法，其特征在于，步骤（7）中，所述磁性标签固定，具体如下：

磁性标签为链酶亲和素修饰的磁性纳米粒子或由磁性纳米粒子构成的磁珠，取浓度为10ug/ml磁性纳米粒子标签20-40ul，滴入Au膜上面，室温下培育20-40分钟，然后用PBS溶液清洗，室温干燥。