[发明专利]一种改良密度梯度离心法测定花粉密度的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物生理学领域，具体涉及一种改良密度梯度离心法测定花粉密度的方法。 

背景技术

花粉为粉状物质，花粉的密度是花粉物理特性重要的指标之一。测定花粉的密度可以衡量花粉的内在品质，而花粉的品质直接影响植物种子的质量。所以测定花粉物理密度可应用于植物繁种的花粉质量的检测工作。测定花粉的密度也可为筛选花粉提供一个科学可行的方法。 

常规的测定粉状物质密度的方法是将粉状物质装入到一定量的含液体介质的李氏瓶内，并使得液体介质充分的浸没粉状颗粒。根据阿基米德定律，粉状物体体积等于它所排开的液体体积，从而算出粉状物单位体积的质量即为密度。利用这种方法测定花粉的密度，首先操作不方便；需要专门的仪器。其次，这种方法需要相对较多的花粉，而花粉收集不易，成本高昂。 

密度离心法的主要用途，主要用于物质的分离，在测定花粉密度方面未见相关报道。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种测量结果准确、重复性好、简便易行的密度梯度离心法测定花粉密度的方法。 

本发明的目的是这样实现的（除非另有说明外，本发明所采用的百分数均为质量百分数）： 

一种改良密度梯度离心法测定花粉密度的方法，包括蔗糖浓度梯度溶液配制、花粉样品处理、花粉样品铺放、密度梯度离心液配制、离心沉降、绘制吸光度标准曲线、测定吸光度及花粉密度计算，具体包括：

A、蔗糖浓度梯度溶液配制：将蔗糖溶于水中，配制成质量百分比分别为20~70%的溶液；

B、花粉样品处理：将蔗糖溶于水中，配置成质量百分比为10%的溶液，称取0.001~0.01g待测花粉混合在100~1000μl 10%蔗糖溶液中；

C、花粉样品铺放：将含有花粉样品的10%蔗糖溶液注入离心管底部；

D、密度梯度离心液配制：采用层铺法将质量百分比20~70%的蔗糖溶液依次注入，已含有待测花粉样品的10%蔗糖溶液的离心管底部，配置成密度梯度离心液；

E、离心沉降：在离心机中，20℃下，以4000~10000rpm速度，对含待测花粉样品的密度梯度离心液离心5~15min，待花粉达到沉降平衡后静置；

F、绘制吸光度标准曲线：选取花粉悬浮所在层相应浓度的蔗糖溶液，绘制待测花粉在该相应浓度的蔗糖溶液中的吸光度标准曲线；

G、测定吸光度值：取花粉沉降平衡后的密度梯度离心液，采用分光光度计在290 nm波长下，测定待测花粉悬浮层蔗糖溶液的吸光度值，利用标准曲线换算成该层浓度梯度下花粉的浓度值

H：花粉密度计算：花粉的密度按照下列公式计算：

其中：

ρ——花粉的密度

OD_n——第n层蔗糖梯度溶液中花粉浓度值

OD——所有含花粉的各蔗糖梯度溶液中花粉浓度值总和

ρ_n——第n梯度蔗糖溶液密度

本发明所述的密度梯度离心法用于测定花粉密度，具有以下优点：

1、对经典的密度梯度离心法进行改良，更适合于花粉密度的测定，且不需要继续做细分梯度的重复测定，操作简便、易行，重复性好；

2、采用科学的公式进行花粉密度的计算，结果准确；

3、测试需样品量少。

附图说明

图1为本发明测定方法的流程框图； 

图2为质量百分比55%的蔗糖溶液中N.alata花粉的吸光度标准曲线； 

图3为质量百分比55%的蔗糖溶液中N.rustica花粉的吸光度标准曲线；

图4为质量百分比50%的蔗糖溶液中N.repanda花粉的吸光度标准曲线；

图5为质量百分比55%的蔗糖溶液中K326花粉的吸光度标准曲线。

具体实施方式

下面结合附图对本发明做进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。 

一种改良密度梯度离心法测定花粉密度的方法，包括蔗糖浓度梯度溶液配制、花粉样品处理、花粉样品铺放、密度梯度离心液配制、离心沉降、绘制吸光度标准曲线、测定吸光度及花粉密度计算，具体包括： 

A、蔗糖浓度梯度溶液配制：将蔗糖溶于水中，配制成质量百分比分别为20~70%的溶液；

B、花粉样品处理：将蔗糖溶于水中，配置成质量百分比为10%的溶液，称取0.001~0.01g待测花粉混合在100~1000μl 10%蔗糖溶液中；