[发明专利]一种复方包被乳酸菌产品及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种复方包被乳酸菌，属于微生物饲料添加剂技术领域，涉及复方包被材料、菌体保护剂和乳酸菌组成的乳酸菌微囊产品及其制备方法。 

背景技术

由于在畜禽养殖业和饲料中长期地、过量地和不合理地使用或滥用抗生素，出现了一系列问题，如引起动物体内菌群失调、紊乱或条件性致病菌异位转移、多重耐药性菌株产生，以及在畜禽产品(如肉、蛋、奶)中的残留和环境污染等，特别是抗生素相关性腹泻、耐药性腹泻，正严重危害着畜牧业的健康发展，导致用药无效或用药量增加，恶性循环。同时，由于广泛的耐药细菌引发的感染也是严重危害人类健康和安全的重大问题之一。为此，产业界都在积极探索和寻找抗生素替代品。微生态制剂作为绿色安全的饲料添加剂逐渐成为抗生素替代品的主力军。 

乳酸菌是动物肠道中的长期定居者，以乳酸菌为主的兼性厌氧菌和厌氧菌占消化道总菌数的90％以上，在维持肠道菌群平衡方面发挥着重要作用，能够提高饲料转化率、促进动物生长、提高动物免疫功能。但由于乳酸菌的抗逆性差，活菌在保存、饲料制粒加工和通过胃肠时的不利环境时容易导致乳酸菌活性降低。对乳酸菌用耐高温高湿的材料进行微囊包被后，可以抵抗伺料加工过程中高温、高湿等不良环境的影响，同时包被材质属于肠溶性包被材质，能够防止胃酸的破坏。现有公开的专利中，由于所采用的包被材料和处理工艺限制，包被后的乳酸菌并不能耐受较高的温度，超过60℃的温度，失活非常严重，而目前饲料制粒加工温度都在75℃以上。使乳酸菌的实际运用受到很大的限制。同时，由于目前大部分已公开的专利都是采用冻干生产工艺，生产动力成本高，不利于规模化生产。 

发明内容

本发明的目的在于：①解决现有技术制备的乳酸菌耐温稳定性差的问题，本发明制备的乳酸菌85℃耐温3分钟，存活率在90％以上。②降低现有公开专利中乳酸菌的生产动力成本，本发明无需采用冻干工艺，生产动力成本大大降低。 

本发明的另一目的在于提供该乳酸菌的制备方法。 

本发明的目的是通过如下技术方案实现的： 

本发明提供的包被乳酸菌由发酵前置包被及发酵完成后包被两级复方包被工艺完成。前置包被是乳酸菌培养到对数期时，包被材质在菌体细胞表层敷着形成膜层，包被材质为海藻酸钠、液体石蜡、氯化钙、阿拉拍胶、明胶两种或多种混合物。后包被是发酵完成后的乳酸菌液经离心分离后的加入稳定保护剂，制粒成20-40目粒形，喷涂后包被材质，在乳酸菌微囊表层形成膜层。所用的稳定保护剂为甘油、玉米淀粉、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠中一种、两种或多种混合物。后包被材质为果胶、卡拉胶、玉米淀粉、羟丙基甲基纤维素中的一种、两种或多种混合物。 

本发明所述的乳酸菌为粪肠球菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌中的一种。 

本发明上述的包被乳酸菌制备方法步骤如下： 

(1)制备乳酸菌发酵液 

①取1支斜面保存的菌体，接种到一级种子液体培养基中培养8±1h，得到一级摇瓶种子液。将一级种子液转接到二级种子培养基中，培养5-6h得到二级发酵液。 

②前置包被材料制备： 

囊材溶液的配制：阿拉拍胶(W/V)2～4％，海藻酸钠(W/V)1～2％加80℃温水，搅拌至完全溶解，121℃灭菌20min，备用；液体石蜡加入1％span80搅拌至混合均匀，121℃灭菌20min，备用； 

固化剂的配制：氯化钙加水溶解，使氯化钙溶液浓度为0.1～0.3mol/L，121℃灭菌20min，备用； 

乳酸菌微胶囊制备：将前述步骤①制备的二级发酵液注入到灭菌囊材溶液，至10⁶cfu/ml左右密度，用高压空气，经无菌滤膜和喷头喷入无菌氯化钙溶液，搅拌固化，倾出上清液，得乳酸菌微胶囊溶液。 

③发酵液的制备 

将前述步骤②制备的乳酸菌微胶囊溶液按1-3％的移种量移种到发酵罐中，接种后罐温控制在38±1℃，pH6.5-6.7，搅拌转速在50-100rpm/min，培养10-12h得到乳酸菌发酵液。 

(2)菌液分离 

将前述步骤④制备的乳酸菌发酵液通过蠕动泵输送到高速管式离心机进行菌液分离，得到菌泥。 

(3)微囊稳定化处理 

制备菌悬液：将步骤(2)制备菌泥，活菌数在10¹¹CFU/g以上。菌泥中加入2-4％甘油和20-35％水，搅拌混匀后得到菌悬液； 

稳定剂材料制备：先将60-80％玉米淀粉、10-20％微晶纤维素混合均匀，再注入2-6％羧甲基纤维素钠液；