[发明专利]产丁二酸的菌株及其生产丁二酸的方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体而言，涉及一株产丁二酸的菌株及其生产丁二酸的方法和应用。 

背景技术

丁二酸（又名琥珀酸），是一种常见的天然有机酸，广泛存在于人体、动物、植物和微生物中。丁二酸作为一种重要的化工原料，在医药、食品以及表面活性剂等行业有着广泛的用途。近年来，随着化石资源的日益枯竭和环境问题的日益严重，采用生物合成法代替传统的化学合成法制备丁二酸备受瞩目，美国能源部将丁二酸列为未来12种最有价值的生物炼制产品之一。 

生物合成丁二酸，是利用细菌，真菌等各种微生物，以葡萄糖或其他各种水解液为碳源，经微生物发酵生产丁二酸。利用微生物发酵法转化可再生资源（葡萄糖、木糖等），由于原料来源广泛且价格低廉，污染小，环境友好，且在发酵过程中可以吸收固定CO₂，能有效缓解温室效应，故成为近年来研究的热点。 

发酵菌株是丁二酸生物合成的关键点之一,但大部分菌株只能产生较低浓度的丁二酸。提高丁二酸的发酵产酸能力有很多的方法，然而迄今为止，在纯厌氧条件下，高效利用葡萄糖为单一性碳源并高产丁二酸的菌株却鲜有报道。 

发明内容

本发明的目的在于提供一株能够在纯厌氧条件下，高效利用葡萄糖为单一性碳源并高产丁二酸的菌株，以及其产生丁二酸的方法和应用。 

为了实现本发明的技术目的，本发明提供了一株产丁二酸的菌株，其分类命名为大肠埃希氏菌（Escherichia coli）BER208，其保藏编号为：CCTCC NO:M 2012351。 

本发明还提供了一种生产丁二酸的方法，包括如下步骤：发酵上述提及的大肠埃希氏菌（Escherichia coli）BER208 CCTCC NO:M 2012351，得到丁二酸。 

进一步地，所述方法包括：将固体平板培养基培养的大肠埃希氏菌BER208接种于种子培养基中培养得到种子液；然后将种子液接种到发酵培养基中以得到丁二酸。 

优选地，所述方法为将经固体平板培养基37摄氏度，厌氧条件培养24小时的大肠埃希氏菌BER208接种于种子培养基，充二氧化碳，在37摄氏度，200转/分钟的条件下厌氧培养12小时得到种子液； 

将所述种子液按照2%的接种量接种于所述发酵培养基中，充二氧化碳，并在37摄氏度厌氧培养48小时以得到丁二酸。

优选地，所述充二氧化碳均为充二氧化碳2分钟，以保存培养时的厌氧环境。 

优选地，所述固体平板培养基的配方为：柠檬酸3 g·L^-1，Na₂HPO₄·12H₂O 4 g·L^-1，KH₂PO₄ 8 g·L^-1，(NH₄)₂HPO₄ 8 g·L^-1，NH₄Cl 0.2 g·L^-1，(NH₄)₂SO₄ 0.75 g·L^-1，MgSO₄·7H₂O 1 g·L^-1，CaCl₂·2H₂O 10.0 mg·L^-1，ZnSO₄·7H₂O 0.5 mg·L^-1，CuCl₂·2H₂O 0.25 mg·L^-1，MnSO₄·H₂O 2.5 mg·L^-1，CoCl₂·6H₂O 1.75 mg·L^-1，H₃BO₃ 0.12 mg·L^-1，Al₂(SO4 )₃ 1.77 mg·L^-1，Na₂MoO₄·2H₂O 0.5 mg·L^-1，柠檬酸铁 16.1 mg·L^-1，琼脂15-20g/L，葡萄糖10-15g/L。