[发明专利]一种构建非人哺乳动物哮喘模型的方法

说明书

技术领域

本发明涉及哮喘动物模型构建领域，特别涉及一种构建非人哺乳动物哮喘模型的方法。

背景技术

支气管哮喘是一种气道慢性非特异性炎症，全球患病人数多，控制哮喘发作需花费大量人力物力。为尽最大可能解除患者痛苦，构建疾病动物模型，研究哮喘的发病机制十分必要。以往认为过敏原诱导Th1/Th2应答失衡致气道嗜酸性粒细胞浸润是哮喘的重要病理特点，此类患者对激素治疗效果敏感。现有技术构建的模型也多以致嗜酸性粒细胞升高为主。此类模型常用构建方法为：分别在第1大和第14天腹腔注射鸡卵蛋白致敏，在第28、29、30连续3天，每天30分钟-1小时1％卵蛋白液雾化激发，第32天处死，收集相关标本。

然而，人们发现一类患者使用激素治疗效果不佳，症状得不到有效控制。研究发现，此类患者气道炎症以中性粒细胞为主，嗜酸性粒细胞轻度增高甚至不增高；外周血除了Th2细胞的增高，还有Th17细胞的增高，且增加的幅度更大；相应细胞因子IL-4/IL-17的ELISA结果也有类似发现。据此提出：静息型T细胞在接收树突状细胞处理、提呈的相关抗原刺激后向Th17细胞方向偏振，诱导哮喘患者气道内中性粒细胞募集。现有技术虽能成功构建相关哮喘模型，但共有三次致敏，分别在第0、7、14天，在第21天激发，连续两周，建模时间较长，且鼻内滴入脂多糖量过大，不能排除气道损伤引起中性粒细胞增多的可能，不符合哮喘是以过敏原诱导体内免疫应答失衡的发病机制。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种构建非人哺乳动物哮喘模型的方法，从哮喘的疾病特点对模型进行全面的评价，缩短激发和致敏时间。

为了达到上述目的，本发明提供了如下技术方案：一种构建非人哺乳动物哮喘模型的方法，其特征在于，包括：

步骤一、在第1天和第7天向非人哺乳动物腹腔注射有效量的含鸡卵蛋白和氢氧化铝凝胶的PBS溶液，同时从非人哺乳动物咽喉壁缓慢滴加有效量的含鸡卵蛋白和脂多糖的PBS溶液；

步骤二、从第13天到第15大连续三天雾化含鸡卵蛋白的PBS溶液，对非人哺乳动物进行抗原的呼吸道致敏。

优选的是，所述构建非人哺乳动物哮喘模型的方法中，同时构建的模型还包括只在腹腔注射等量的含鸡卵蛋白和氢氧化铝凝胶的PBS溶液的嗜酸性粒细胞哮喘模型组以及在腹腔注射等量的含氢氧化铝凝胶的PBS溶液的正常对照组，前者为含鸡卵蛋白的PBS溶液激发，后者为PBS溶液激发。

优选的是，所述构建非人哺乳动物哮喘模型的方法中，所述的非人哺乳动物是小鼠。

优选的是，所述构建非人哺乳动物哮喘模型的方法中，从小鼠咽喉壁滴加含100μg鸡卵蛋白和0.1μg含脂多糖的PBS溶液，共50μL，使小鼠慢慢将PBS溶液吸入肺部，滴加时用移液枪分次吸取滴加，每次10μL；向腹腔注射含100μg鸡卵蛋白和100μL氢氧化铝凝胶的PBS溶液，共200μL。

优选的是，所述构建非人哺乳动物哮喘模型的方法中，所述步骤2)中的雾化用的含鸡卵蛋白的PBS溶液浓度为1％。

优选的是，所述构建非人哺乳动物哮喘模型的方法中，麻醉小鼠的麻醉剂为浓度4％水合氯醛，剂量为0.08～0.1ml/10g。

本发明实施例所提供的技术方案，加入了以前从未使用过的气道致敏方法，即从小鼠咽喉壁将含鸡卵蛋白和脂多糖的PBS溶液缓慢滴入气道，且有效地控制了用量，排除了气道损伤引起中性粒细胞增多的可能，符合哮喘是以过敏原诱导体内免疫应答失衡的发病机制。本发明在最后一次抗原激发24小时后，处死小鼠，并从血清IgE水平、气道高反应性、浸润到气道中炎症细胞的类型及数量和肺组织效应T细胞偏振情况等方面将此模型与嗜酸性粒细胞哮喘模型组和正常对照组模型进行了对比评价，因Th17细胞应答增强致使气道中性粒细胞增高的非人哺乳动物哮喘模型构建成功。

附图说明

图1为本发明所述的构建非人哺乳动物哮喘模型的方法的流程示意图；

图2为各组小鼠肺组织气道炎症情况(HE，×200)，A图为正常对照组，B图为嗜酸性粒细胞哮喘模型组，C图为中性粒细胞哮喘模型组；

具体实施方式

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要的附图作简单的介绍。

本发明提供了一种构建非人哺乳动物哮喘模型的方法，排除了气道损伤引起中性粒细胞增多的可能，缩短了激发和致敏时间。

本发明实施例提供的一种构建非人哺乳动物哮喘模型的方法，包括：