[发明专利]一种由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法及其所用培养基

权利要求书

1.一种由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法，其特征在于：所述方法是以黑曲霉XZ-3S为原料，在曲盘发酵培养基上进行固态发酵，获得发酵曲料后对发酵曲料用缓冲液进行提取，获得木聚糖酶液；所述曲盘发酵培养基的组成为曲盘装100g基料，(NH₄)₂SO₄0.5～1.5g，蛋白胨0.5～1g，KH₂PO₄0.3～0.4g，CaCl₂0.2～0.3g，ZnCl₂0.1～0.2g，MgSO₄0.1～0.2g，Fe₂(SO₄)₃0.02～0.08g，吐温400.4～0.8g，自来水120～140mL，自然pH，其中基料的组成为麸皮50～80g，玉米芯10～40g，豆饼粉10～20g。 

2.根据权利要求1所述的由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法，其特征在于：所述固体发酵的条件为曲盘发酵培养基121℃灭菌40min，冷却后接种10mL黑曲霉XZ-3S麸曲孢子悬液，该悬液中孢子浓度为5×10⁷个/mL，29℃静置培养65～72h，期间分别于24～28h和43～47h补水20mL时各翻曲一次。 

3.根据权利要求1所述的由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法，其特征在于：所述缓冲液为0.05mol/L磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。 

4.根据权利要求1～3中任一权利要求所述的方法，其特征在于：对发酵曲料用缓冲液进行提取的过程为称取发酵曲料1g，加入29mL pH4.0、0.05mol/L磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，40℃条件下浸提30min，滤纸过滤，所得滤液即为木聚糖酶液。 

5.一种由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法，包括下述步骤： 

(1)、斜面种子培养：去皮马铃薯200g/L，蔗糖20g/L，琼脂20g/L，pH6.0；121℃灭菌20min，放置试管斜面；冷却后接种黑曲霉XZ-3S菌株，30℃培养96h； 

(2)、麸曲种子制备：250mL三角瓶装10g基料、(NH₄)₂SO₄80mg、自来水10mL、pH6.0，充分混匀，121℃灭菌40min，冷却后接种步骤(1)所得的黑曲霉XZ-3S试管斜面种子，30℃静置培养96h，期间分别于24h和44h各翻曲一次，所述基料为麸皮； 

(3)、麸曲孢子悬液制备：100mL三角瓶装20mL去离子水，放入10-15粒玻璃珠，121℃灭菌20min，放置室温后，接入1接种铲麸曲种子，先用玻璃珠振荡分散，然后再用脱脂棉过滤，调整孢子浓度为5×10⁷个/mL； 

(4)、曲盘发酵：曲盘发酵培养基121℃灭菌40min，冷却后接种10mL黑曲霉XZ-3S麸曲孢子悬液，该悬液中孢子浓度为5×10⁷个/mL，29℃静置培养65～72h，期间分别于24～28h和43～47h补水20mL时各翻曲一次；所述曲盘发酵培养基的组成为cm曲盘装100g基料、(NH₄)₂SO₄0.5～1.5g、蛋白胨0.5～1g、KH₂PO₄0.3～0.4g、CaCl₂0.2～0.3g、ZnCl₂0.1～0.2g、MgSO₄0.1～0.2g、Fe₂(SO₄)₃0.02～0.08g、吐温400.4～ 0.8g、自来水120～140mL，自然pH，其中基料的组成为麸皮50～80g，玉米芯10～40g，豆饼粉10～20g； 

(5)、粗酶液提取：曲盘发酵结束后称取发酵曲料1g，加入29mL pH4.0、0.05mol/L磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，40℃条件下浸提30min，滤纸过滤，所得滤液即为木聚糖酶液。