[发明专利]一种同时检测奶粉中香兰素、乙基香兰素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及了一种同时检测奶粉中香兰素、乙基香兰素的方法，具体涉及一种高效液相色谱法测定奶粉中香兰素、乙基香兰素含量的检测方法。

背景技术

香兰素(3-甲氧基-4-羟基苯甲醛)、乙基香兰素(3-乙氧基-4-羟基苯甲醛)均为合成香精，两者均为白色或微黄色结晶性粉末，微溶于水，溶于乙醇、甘油、乙醚、氯仿及香料中。香兰素具有香荚兰香气及浓郁的奶香，乙基香兰素香气是香兰素的3-4倍，广泛用于食品、巧克力、冰淇淋、饮料以及日用化妆品中起增香和定香作用。据欧盟专家委员会2000年报道，大剂量可导致头痛、恶心、呕吐、呼吸困难，甚至损伤肝、肾。

GB2760-2011《食品添加剂使用标准》中规定：较大婴儿和幼儿配方食品中可以使用香兰素、乙基香兰素和香荚兰豆浸膏，最大使用量分别为5mg/100mL、5mg/100mL和按照生产需要适量使用，其中100mL以即食食品计，生产企业应按照冲调比例折算成配方食品中的使用量。我国禁止在0-6月的1阶段婴儿配方奶粉中添加。

目前，香兰素的检测方法较多，主要包括高效液相色谱法、气相色谱法、气相色谱-质谱法、液相色谱-质谱法、离子色谱法等，但提取奶粉中香兰素、乙基香兰素的前处理方法不尽相同。

李小运、史海良等采用50℃热水溶解奶粉，超声提取，经酸沉淀蛋白后，过滤，滤液分别采用高效液相色谱仪、液相色谱-串联质谱仪分析。(李小运等，液相色谱-质谱联用技术同时测定婴幼儿配方奶粉中甲基香兰素和乙基香兰素，农业机械，2012(9)：126-127；史海良等，HPLC法测定婴幼儿配方奶粉中香兰素，粮油加工，2012(12)：175-176)

欧菊芳等将奶粉样品加水，振荡混匀后，转移至分液漏斗，加稀硫酸溶液、乙醇、乙醚萃取，合并乙醚层于另一分液漏斗。用稀NaOH溶液分两次洗涤乙醚液，弃乙醚层，合并水层，用稀硫酸调pH至酸性。再用乙醚分两次萃取，收集乙醚层，旋转蒸干，无水乙醇复溶，气相色谱仪测定。(欧菊芳等，气相色谱法测定婴幼儿配方奶粉中香兰素和乙基香兰素，江西科学，2011，29(1)：23-26)

经实验得知，乙基香兰素在热水中的溶解性不好，在甲醇、乙醇中的溶解度较高，为实现两种香精的同时检测，迫切需要寻找一种简便快速、准确度高的前处理方法，以满足奶粉中两种物质检测工作的需要。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于寻找一种简便、快速、有效的前处理方法，提取奶粉中香兰素、乙基香兰素，从而提高检测效率。

本发明所述的的技术问题可通过以下技术方案得以解决：

(1)准确称取1-2g奶粉样品于50mL离心管中，加入10-20mL无水乙醇，超声提取20-30min；

(2)提取液在8000-9000r/min条件下离心3-5min，取上清液过0.22μm微孔滤膜，滤液待测；

(3)滤液经高效液相色谱分离，二极管阵列检测器检测，定量分析。

采用如下的高效液相色谱条件：

仪器：Agilent 1200液相色谱仪，配有二极管阵列检测器；

色谱柱：碳十八烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱4.6×150mm，5μm；

流动相：乙腈∶0.02mo l/L磷酸二氢钠溶液＝25∶75，v/v；

流速：0.8-1.2mL/min；

进样量：10-50μL；

柱温：25-40℃；

检测波长：278nm。

本发明的有益效果在于，所建立的奶粉中香兰素、乙基香兰素的同时检测方法，具有前处理简单、基质干扰小、准确度高等特点，能够满足日常检测工作的需要。

说明书附图

图1香兰素、乙基香兰素标准品的HPLC图谱

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明并不局限于具体实施例。

实施例1某品牌幼儿配方奶粉(3段)中香兰素、乙基香兰素含量的测定

1、分析步骤

称取奶粉样品1.00g，精确到0.0001g，于50mL离心管中，加入10mL无水乙醇，混匀后超声提取20min，8000r/min冷冻离心5min，上清液过0.22μm微孔滤膜，待HPLC测定。

2、高效液相色谱条件

流动相：乙腈∶0.02mol/L磷酸二氢钠溶液＝25∶75，v/v；流速：1.0mL/min；进样量：10μL；柱温：30℃；检测波长：278nm。