[发明专利]一种提取银耳多糖和银耳蛋白的方法

权利要求书

1.一种利用双水相体系提取银耳多糖和银耳蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将银耳菌接种到斜面培养基上，在24～26℃下活化培养6~8d，然后将银耳孢子接入到液体种子培养基中，在150~200r/min、24～26℃下培养3~5d，制得液体种子；将液体种子按5～10wt%的接种量接入液体发酵培养基中，在温度24～26℃、150～200r/min条件下，培养4～6天，制得发酵液；

（2）将步骤（1）制得的发酵液采用截留分子量为3000～6000Dal的超滤膜浓缩，截留液为含有银耳孢子和胞外多糖的浓缩液，破碎银耳孢子，得到银耳孢子破碎液；

（3）在20~30℃下，配制无机盐水溶液，向该无机盐水溶液中添加聚乙二醇，在总体系中无机盐质量百分比浓度为10～30%，聚乙二醇在总体系中的质量百分比浓度为10%～30%，混合均匀，制得聚乙二醇/无机盐双水相体系；

（4）向步骤（2）制得的银耳孢子破碎液中按体积比1:（1～5）加入步骤（3）制得的聚乙二醇/无机盐双水相体系，搅拌10～30min混匀后，静置5～15min分相，制得无机盐下相和聚乙二醇上相；

（5）将步骤（4）制得的无机盐下相离心分离，取上清液，采用截留分子量为3000～6000Dal的超滤膜浓缩，截留液经冷冻干燥后，制得银耳多糖；

（6）向步骤（4）制得的聚乙二醇上相中加入水和无机盐，使无机盐在总体系中的质量浓度为10～30%，搅拌10～30min混匀后，静置10～20min分相，制得无机盐下相和聚乙二醇上相，将制得的无机盐下相，采用截留分子量为6000～10000Dal的超滤膜过滤，收集截留液，冷冻干燥制得银耳蛋白。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中通过液体发酵产生银耳多糖的银耳菌菌种编号为CICC50179、CICC50180、ACCC50546、ACCC51351、CGMCC5.466或CGMCC5.526。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的斜面培养基组分如下：葡萄糖20g，蛋白胨10g，KH₂PO₄3g，MgSO₄1.5g，维生素B₁0.005g，琼脂20g，20%马铃薯煮汁1000mL，pH自然。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的液体种子培养基组分如下：葡萄糖20g，蛋白胨10g，KH2PO₄1.5g，MgSO₄0.75g，20%马铃薯煮汁1000mL，pH自然。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的发酵培养基组分如下：可溶性淀粉40g，葡萄糖20g，蛋白胨5g，KH2PO₄1g，MgSO₄0.75g，琼脂5g，水1000mL，pH自然。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中的超滤浓缩液中孢子的质量百分比浓度为7～10wt%。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）中的孢子破碎采用珠磨机破碎，转速为2400～5000r/min，时间1~5min，操作温度5~40℃。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（2）、（5）、（6）中的超滤膜工作压力为0.1～0.5MPa，温度为25℃。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）、（6）中的无机盐选自硫酸铵、硫酸钠、磷酸氢二钠、磷酸钾或氯化钠之一。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤（3）、（6）中的双水相体系中的聚乙二醇分子量为1000。