[发明专利]一种高特异高敏感检测分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的方法

说明书

技术领域

 本发明涉及疾病检测技术领域，具体的说，是一种高特异高敏感检测分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的方法。

背景技术

蜡样芽孢杆菌是芽孢杆菌属中的一种，1950年首次在挪威报告，会引起食物中毒，中毒者症状为呕吐、腹痛、腹泻，其中呕吐症状是由蜡样芽孢杆菌致吐（cereulide）毒素造成，并且该产物不是蜡样芽胞杆菌的标准产物之一，蜡样芽孢杆菌致吐（cereulide）毒素是一种由非核糖调控缩氨酸综合(NRPS)产生的即使在菌体内也是不常见的多肽。快速检测分泌呕吐毒素蜡样芽胞杆菌，对提高致病性蜡样芽胞杆菌的检测和诊断效率，确定有效治疗方案具有很大意义。

发明内容

本发明公开了一种高特异高敏感检测分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的方法，提高了分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的检测和诊断效率。

为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：

一种高特异高敏感检测分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的方法，包括以下步骤：

步骤1）制备反应液

反应液组成及含量为

8u/ul Bst核酸聚合酶                         8u

10X耐热聚合酶反应缓冲液                1X,MgSO4 2mM

4M 甜菜碱                                    1M

10mM d-NTP混合液                             400μM

内引物

   BC-FIP                                   40umol

   BC-BIP                                   40umol

外引物

    BC-F3                                   5umol

    BC-B3                                   5umol

标本核酸                                     20ng

添加焦碳酸二乙酯处理水至总量达到25ul;

步骤2）将上述反应液放入63℃烘箱进行反应30-60min，浑浊为阳性;

步骤3）提取临床分离分泌呕吐毒素蜡样芽胞杆菌，环境分离蜡样芽胞杆菌，以及若干临床分离金黄色葡萄球菌、头皮葡萄球菌、人型葡萄球菌、表皮葡萄球菌、草绿色链球菌、大肠杆菌、克雷伯菌的核酸，多次进行反应，观察它们的阴阳性。

进一步的，所述外引物BC-F3的序列为CTCTTGCATGCTTGGAATT。

进一步的，所述外引物BC-B3的序列为CCTTCGCTTCTAATCCAACA。  

进一步的，所述内引物BC-FIP的序列为

ACACACCAAGATATTGCGCAT-GATACAGTTCCAACTTTTAGATCG。

 进一步的，所述内引物BC-BIP的序列为TTAGTGTGATGTTCGCACTTCAA-CTATTTGTCGCAATCACCGT。

进一步的，所述反应液中加入荧光显示物质溴化乙锭、钙黄绿素进行实时检查。

本发明的有益效果是：

本发明通过配制反应液，设计引物序列，能快速、准确的检测分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌，并及时采取相应的措施，减少了疾病的发生率。

具体实施方式

下面将结合实施例，来详细说明本发明。

 一种高特异高敏感检测分泌呕吐毒素蜡样芽孢杆菌的方法，包括以下步骤：

步骤1）制备反应液

反应液组成及含量为

8u/ul Bst核酸聚合酶                         8u

10X耐热聚合酶反应缓冲液                1X,MgSO4 2mM

4M 甜菜碱                                    1M

10mM d-NTP混合液                             400μM

内引物

   BC-FIP                                   40umol