[发明专利]一种新型免疫佐剂及快速免疫方案

说明书

技术领域

本发明涉及一种新型免疫佐剂及免疫方案，提供了一种应用于单克隆抗体制备的水溶性佐剂及应用这种佐剂进行快速免疫的方法。该方法利用组合佐剂和新颖的的动物免疫方案，可以快速引起小鼠免疫应答反应，这个免疫周期28天即可完成。 

背景技术

抗原、免疫佐剂与动物免疫

抗原是能够刺激动物机体产生免疫应答的外源性物质。免疫佐剂，本身不具抗原性，但同抗原一起刺激机体后，能增强免疫效果。免疫佐剂的生物学作用包括：(1)改变抗原的物理性状，减缓抗原物质的释放，延长抗原的作用时间；(2)增加抗原表面积，利于巨噬细胞的吞噬；(3)能够刺激巨噬细胞对抗原的处理；(4)促进淋巴细胞间的连接，增强辅助性T淋巴细胞的作用；(5)可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体；(6)可提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴度。

用抗原对动物（通常是小鼠）进行免疫是单克隆抗体制备过程的第一步，也是至关重要的一步。动物对抗原免疫应答反应是否良好，能否产生滴度高，特异性好的抗体直接决定了后期筛选单克隆杂交瘤细胞株的难度和所获抗体的有效性。而免疫佐剂和免疫方案是动物能否产生良好免疫应答反应的重要因素。免疫佐剂按其水溶性可分为水溶性佐剂和油性佐剂：油性佐剂，如常用的弗氏佐剂、植物油等，在免疫之前需经过乳化形成油包水的状态才能进行免疫；水溶性佐剂，不需要繁琐的乳化过程，直接与抗原混合后注射动物即可。 

免疫方法

弗氏佐剂是目前最常用的动物免疫佐剂，已有多种品牌的商品供应，其主要成分为石蜡油和羊毛脂等油脂类。免疫过程中弗氏佐剂与抗原水溶液等体积混合后通过乳化制备成油包水的状态，在注射入机体后将抗原持续缓慢释放，刺激机体免疫应答的发生。应用弗氏佐剂的传统免疫方案通常需要通过初次免疫及加强免疫，共计55天的时间才能获得充分免疫应答。在此过程中免疫原需要较长时间才能被动物体内的免疫系统捕获、加工、提呈，刺激特定的淋巴细胞分类增殖，产生抗体。当免疫原的稳定性较差时（如某些易降解蛋白、人工合成抗原和一些经载体偶联的小分子半抗原等），易受到体内pH、酶、金属离子等因素的影响而被降解，失去其抗原性，造成最终免疫效果不佳。一个良好的免疫方案可缩短上述免疫应答过程，使稳定性低的蛋白和小分子物质被分解的可能性降低，人工抗原受机体影响减少，进而产生特异性抗体的机会增加。本发明所涉及的免疫方案，应用了常规的弗氏完全佐剂（油性佐剂）和一种新颖的水溶性佐剂（以下简称Quick-Ab佐剂）。其基本原理是：应用弗氏完全佐剂进行初次免疫后，再用Quick-Ab佐剂在短时间内进行多次免疫刺激，增强机体免疫应答效果，加快浆细胞生产抗体能力，获得更高滴度、更高亲合力的抗体。整个免疫周期仅为28天，免疫周期与传统免疫周期相比整整缩短一半的时间。

发明内容

本发明的目的是以弗氏完全佐剂乳化后的抗原注射到动物体内引起初次免疫应答后，再将QuickAb水溶性佐剂和抗原直接注射到动物脾脏，通过在短时间内连续多次刺激动物免疫系统，更快获得高效价、高亲和力的抗体。 

本发明是通过以下技术方案实现的。 

与弗氏完全佐剂相配合，使用Quick-Ab新型免疫佐剂，以新的免疫程序对动物实施免疫，免疫动物能快速产生特异性免疫应答。具体步骤如下： 

1. 初次免疫：将一定剂量的抗原（蛋白、偶联载体的小分子）与弗氏完全佐剂按体积比1:1混合(250微升/只)，抗原体积不足部分用50mM的PBS代替，经过乳化，常规背部多点皮下注射免疫动物；

2. 加强免疫：按初次免疫一半的抗原量与Quick-Ab佐剂体积比1:1混合，将混合物经皮穿刺直接注入脾脏进行免疫；分别在初次免疫后的第14天、第17天、第21天免疫3次；

3. 抗血清检测：第28天动物采血检测效价。

附图说明

附图1  地高辛结构式 

附图2  LPS结构示意图

表1 抗地高辛小鼠血清效价检测结果。本发明方法与传统方法比较，血清中抗地高辛抗体的效价足足提高了30倍。

表2抗脂多糖小鼠血清效价检测结果。本发明方法与传统方法比较，血清中抗脂多糖抗体的效价平均提高了5倍。 

具体实施方式

以下借助实例进一步举例描述本发明。本领域技术人员可以理解到，这些实施例并不以任何方式限制本发明待批权利要求的范围。 

实施例1. Quick-Ab水溶性佐剂的制备