[发明专利]一种大肠杆菌高效生产脂肪酸的系统及其构建方法有效
| 申请号： | 201210376058.7 | 申请日： | 2012-09-28 |
| 公开（公告）号： | CN102899281A | 公开（公告）日： | 2013-01-30 |
| 发明（设计）人： | 马钢;贺林;王右;吴宇奇;郭华庆;尹若楠;索洋;奚瑞;于一能;吴佳杰;华楠;张悦涵;靳振明;张少博 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P7/64;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人： | 胡晶 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 大肠杆菌 高效 生产 脂肪酸 系统 及其 构建 方法 | ||
1.一种大肠杆菌高效生产脂肪酸的系统，包括大肠杆菌，其特征在于，所述大肠杆菌携带有质粒系统，所述质粒系统包括大肠杆菌脂肪酸代谢途径的融合蛋白。
2.如权利要求1所述的大肠杆菌高效生产脂肪酸的系统，其特征在于，所述融合蛋白中包括若干大肠杆菌脂肪酸代谢途径关键蛋白，通过膜蛋白将该些蛋白锚定在膜上并通过异源二聚体将大肠杆菌脂肪酸代谢途径关键蛋白按照代谢顺序串联在一起。
3.如权利要求2所述的大肠杆菌高效生产脂肪酸的系统，其特征在于，所述大肠杆菌脂肪酸代谢途径关键蛋白选自酶FabI、FabG、FabZ、TesA中的一种或几种，膜蛋白为膜蛋白Lgt，异源二聚体选自二聚体蛋白GBD Domain、GBD Ligand、SH3Domain、SH3Ligand的一种或几种。
4.一种权利要求1或2或3所述的大肠杆菌高效生产脂肪酸的系统的构建方法，其特征在于，通过膜蛋白将大肠杆菌脂肪酸代谢途径关键蛋白锚定在膜上并通过异源二聚体将所述大肠杆菌脂肪酸代谢途径关键蛋白按照代谢顺序串联在一起，之后将其构建在质粒中形成质粒系统，将所述质粒系统在大肠杆菌中共表达使其定位并聚集于大肠杆菌细胞膜上，即得到大肠杆菌高效生产脂肪酸的系统。
5.如权利要求4所述的大肠杆菌高效生产脂肪酸的系统的构建方法，其特征在于，构建多个质粒系统，将该些质粒系统在大肠杆菌中共表达。
6.如权利要求4所述的大肠杆菌高效生产脂肪酸的系统的构建方法，其特征在于，所述方法还包括，首先，分别制备大肠杆菌脂肪酸代谢途径关键蛋白、膜蛋白和异源二聚体片段。
7.如权利要求6所述的大肠杆菌高效生产脂肪酸的系统的构建方法，其特征在于，所述大肠杆菌脂肪酸代谢途径关键蛋白选自酶FabI、FabG、FabZ、TesA中的一种或几种，膜蛋白为膜蛋白Lgt，异源二聚体选自二聚体蛋白GBD Domain、GBD Ligand、SH3Domain、SH3Ligand的一种或几种。
8.如权利要求7所述的大肠杆菌高效生产脂肪酸的系统的构建方法，其特征在于，所述片段的制备方法为：以大肠杆菌基因组或大鼠cDNA或小鼠cDNA为模板，用引物进行PCR扩增或PCR扩增后再进行重叠PCR。
9.一种权利要求1或2的系统用于大肠杆菌生产脂肪酸的用途。
10.一种使用权利要求1或2的系统生产脂肪酸的方法，其特征在于，将携带有质粒系统的大肠杆菌于一LB培养基中培养，得到种子液，之后将该种子液接种到另一LB培养基中培养，然后加入诱导剂进行诱导表达。
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