[发明专利]酸性重组蛋白药物的纯化方法

权利要求书

1.一种酸性重组蛋白药物的纯化方法，以平均等电点pI小于7的酸性蛋白为目的蛋白，所述蛋白药物预先经粗提纯处理，其特征在于，用提供阴离子交换作用及疏水相互作用的混合模式层析来进一步精细纯化，该层析过程包括：

调节样品及平衡缓冲液pH值高于目的蛋白的平均pI 1-3个pH单位，然后以过载方式进行上样，待目的蛋白吸附饱和继而开始流穿后，收集流穿液，得到纯化的目的蛋白，整个层析过程中杂质主要被吸附在层析柱上。

2.如权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述蛋白药物由微生物细胞表达或哺乳动物细胞，如重组人血清白蛋白rHSA或TNFR-Fc融合蛋白，优选大肠杆菌或酵母菌表达的rHSA，或优选CHO细胞表达、经包括Protein A亲和层析的粗纯化制得的TNFR-Fc融合蛋白。

3.如权利要求2所述的纯化方法，其特征在于，所述蛋白药物为酵母菌表达的重组人血清白蛋白rHSA，上样前调节样品及平衡缓冲液的离子强度至1-5mS/cm。

4.如权利要求3所述的纯化方法，其特征在于，所述平衡缓冲液为20-70mM、pH6.5-7.5的磷酸盐缓冲液A，上样前用样品缓冲液将样品进行缓冲液交换，所述样品缓冲液为20-70mM、pH6.5-7.5的磷酸盐缓冲液。

5.如权利要求4所述的纯化方法，其特征在于，所述层析的上样量为300~550 mg/ml介质。

6.如权利要求2所述的纯化方法，其特征在于，所述蛋白药物为TNFR-Fc融合蛋白，上样前调节样品及平衡缓冲液的离子强度至18-30mS/cm。

7.如权利要求6所述的纯化方法，其特征在于，所述平衡缓冲液为20-50mM、pH6.5-7.5的磷酸盐缓冲液B，缓冲液B包含200-350mM NaCl；上样前用样品缓冲液将样品进行缓冲液交换，所述样品缓冲液包含200-350mM NaCl，为20-50mM、pH6.5-7.5的磷酸盐缓冲液。

8.如权利要求7所述的纯化方法，其特征在于，所述层析的上样量为150~280 mg/ml介质。 

9.如权利要求1-8任一项所述的纯化方法，其特征在于，所述的混合模式介质为以琼脂糖为基质的介质，如Capto Adhere，或为以纤维素为基质的介质，如PPA HyperCel或HEA HyperCel。

10.如权利要求9所述的纯化方法，其特征在于，所述层析的流速为90-120cm/h。