[发明专利]M2e合成肽猪流感病毒通用疫苗及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种M2e合成肽猪流感病毒通用疫苗及其应用。

背景技术

猪流感(swine influenza，SI)是由隶属于正黏病毒科的猪流感病毒(swine influenza virus，SIV)引起的猪急性高度传染性疾病。主要临床症状表现为体温升高、食欲不振、呼吸困难、咳嗽、流产以及延迟出栏等，是目前危害全世界养猪业的重要疫病之一。猪流感曾多次在世界上引起大的爆发和流行，其中最严重的一次是1918年西班牙大流感，全球近2100万人感染死亡。2009年4月甲型H1N1流感病毒在墨西哥爆发，迅速引发了21世纪人类历史上第一次流感大流行，给人类健康和社会发展造成巨大损失。抗原分析结果显示，此次甲型H1N1流感病毒来源于北美的H1N1亚型猪流感病毒，能够在人群中广泛传播并造成部分感染人员死亡。其它动物源性流感病毒，尤其是高致病性禽流感病毒同样出现了感染人类的变异毒株，很可能会造成新的人类流感大流行(Garten等，Science，2009，325：197-201)，人类面临流感病毒的威胁日益加剧。与此同时，近年来我国部分猪场也发生了猪流感的流行，给养殖业带来很大的经济损失。

目前预防流感发生与传播的最有效方式是疫苗接种，而现有的流感疫苗主要针对病毒表面糖蛋白HA和NA产生特异性抗体。HA抗体能够阻止病毒感染宿主细胞，中和病毒的感染力；NA抗体能够抑制宿主细胞内新形成的病毒粒子的释放，从而抑制病毒的传播。但在选择压力下，HA蛋白平均每年出现3-4个氨基酸位点突变，每2-5年突变累积导致抗原漂移；而动物流感病毒和人流感病毒重组或动物流感病毒直接传播给人类导致新的HA亚型的出现(如人类H5N1，H7N7及H9N2流感病毒)则会引发抗原转换。HA抗原的频繁变异使疫苗免疫产生的特异性抗体与其结合能力逐渐降低，导致疫苗失去有效性，严重限制了疫苗的长效保护能力(Prabhu等，J Virol，2009，83：2553-2562)。因此，世界卫生组织会根据不断更新的流感监测信息定期更改推荐疫苗株，而流感疫苗的研发和生产也随之更新，这不但消耗大量的人力和物力，而且新疫苗生产开发还面临时效性和有效性的问题。此外，流感病毒血清型众多，现有疫苗在各个血清型之间的交叉保护力较差，这也给疫苗的研究和应用带来了许多限制。因此，研制一种能够应对流感病毒快速变异，并具有广泛保护作用的通用疫苗具有重要的应用价值。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种猪流感病毒通用疫苗，该疫苗是由A型流感病毒的M2蛋白N端保守的23个氨基酸序列(简称M2e)与通用型辅助性Th表位通过分支肽结构连接而成，该疫苗不仅具有长效保护能力，而且具有广泛保护作用。

此外，还需要提供一种上述猪流感病毒通用疫苗在制备预防或治疗猪流感的药物中的应用。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现：

在本发明的一个方面，提供了一种猪流感病毒通用疫苗，所述疫苗具有Th-L-nM2e或nM2e-L-Th结构，其中，

Th为通用型辅助性T细胞表位，该通用型辅助性T细胞表位包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；

M2e为A型流感病毒M2蛋白N端保守的23个氨基酸序列，其氨基酸序列序列如SEQ IDNO：2所示，n为M2e的数量，n的值为2～8；

L为连接Th与M2e的连接肽，该连接肽为分支肽，选自下述结构式：

其中，K代表赖氨酸，C代表半胱氨酸，CH₂HO是乙酰基，M2e与上述分支肽中的半胱氨酸相连接。

本发明猪流感病毒通用疫苗的上述分支肽结构中，由3个K(赖氨酸)组成分支结构的支架，一个赖氨酸有两个氨基，可以接两个赖氨酸，这两个赖氨酸的氨基可以再接四个肽链。所以分支肽的分支可以是2至8个，甚至更多，本发明一个具体实施例中的M2e合成肽的分支有四个。本发明利用分支肽可以提高M2e的密度，从而提高合成肽的免疫原性。

优选的，所述分支肽L具有下述结构式：

在本发明的优选实施例中，猪流感病毒通用疫苗具有下述结构式：

为了增加上述优选实施例的猪流感病毒通用疫苗结构的稳定性，在肽链的氨基端(即M2e序列的游离末端)可以进行乙酰化修饰，在肽链的羧基端(即通用型辅助性T细胞表位的游离末端)可以进行酰胺化修饰。

本发明的另一方面，提供了一种疫苗组合物，包含：上述猪流感病毒通用疫苗、以及佐剂。