[发明专利]检测螺旋霉素、链霉素、庆大霉素、新霉素的试纸条及方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测螺旋霉素、链霉素、庆大霉素、新霉素的试纸条及方法，具体涉及一种用于检测牛奶中螺旋霉素、链霉素、庆大霉素、新霉素的胶体金试纸条。

背景技术

链霉素、庆大霉素、新霉素属于氨基糖苷类抗生素，被广泛应用于动物疾病的治疗，由于这些药物具有神经毒性和肾脏毒性，在动物食品中的残留会影响人类健康，欧美国家及我国均要求其限量使用。螺旋霉素为大环内酯类抗生素，可用于治疗由革兰氏阳性菌和某些革兰氏阴性菌引起的耳、鼻、喉和呼吸道感染。由于肝胆系统是乙酰螺旋霉素排泄的主要途径，故严重肝功能不全患者慎用该品。农业部第235号文件《动物性食品中兽药最高残留限量》中规定链霉素在牛奶中残留限量为200μg/L，庆大霉素在牛奶中残留限量为200μg/L，新霉素在牛奶中残留限量为500μg/L。欧盟在动物源性食品最高残留限量规定2377/90/EC规定螺旋霉素在牛奶中最大残留限量为200μg/kg。

目前，氨基糖甙类抗生素、大环内酯类抗生素残留监控中免疫测定法仍是最常见的分析手段，免疫分析方法与仪器检测方法相比，样品前处理过程较简单，适合进行大规模现场检测等。胶体金免疫层析试纸条已广泛用于药物残留检测中，具有操作简便、快速、不需要任何设备等优点，目前已成为免疫学检测发展方向之一。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测螺旋霉素、链霉素、庆大霉素、新霉素的胶体金快速检测试纸条。

本发明所提供的试纸条包括试纸、微孔试剂，微孔试剂具有微孔塞，试纸包括反应膜、样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板；所述微孔试剂中分别冻干有螺旋霉素单克隆抗体-胶体金标记物、链霉素单克隆抗体-胶体金标记物、庆大霉素单克隆抗体-胶体金标记物和新霉素单克隆抗体-胶体金标记物，反应膜上包括检测线和质控线，均呈与所述试纸的长相垂直的条带状，检测线分别包被有螺旋霉素半抗原-载体蛋白偶联物、链霉素半抗原-载体蛋白偶联物、庆大霉素半抗原-载体蛋白偶联物、新霉素半抗原-载体蛋白偶联物，质控线包被羊抗鼠抗抗体。

所述螺旋霉素半抗原-载体蛋白偶联物是由螺旋霉素半抗原与载体蛋白偶联得到，所述链霉素半抗原-载体蛋白偶联物是由链霉素半抗原与载体蛋白偶联得到，所述庆大霉素半抗原-载体蛋白偶联物是由庆大霉素半抗原与载体蛋白偶联得到，所述新霉素半抗原-载体蛋白偶联物是由新霉素半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清白蛋白、甲状腺蛋白、血蓝蛋白、人血清白蛋白。

所述螺旋霉素单克隆抗体是以螺旋霉素半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得的，链霉素单克隆抗体是以链霉素半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得的，庆大霉素单克隆抗体是以庆大霉素半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得的，新霉素单克隆抗体是以新霉素半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得的。

所述保护膜粘贴在样品吸收垫上，为检测端，上面有MAX标记线。

所述检测线位于近于有MAX标记的保护膜的一端，所述质控线位于远离有MAX标记的保护膜的一端。

所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或全血滤膜；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜为硝酸纤维素膜；所述保护膜为PE材质保护膜。

本发明的另一个目的是提供一种制备上述试纸条的方法，其包括步骤：

1）制备冻干有螺旋霉素单克隆抗体-胶体金标记物、链霉素单克隆抗体-胶体金标记物、庆大霉素单克隆抗体-胶体金标记物和新霉素单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂；

2）制备分别包被有螺旋霉素半抗原-载体蛋白偶联物、链霉素半抗原-载体蛋白偶联物、庆大霉素半抗原-载体蛋白偶联物和新霉素半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；

3）将2）制备好的反应膜与样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板组装成试纸；

4）将1）和3）制备好的冻干有螺旋霉素单克隆抗体-胶体金标记物、链霉素单克隆抗体-胶体金标记物、庆大霉素单克隆抗体-胶体金标记物和新霉素单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂和试纸组装成试纸条。

具体地说，步骤包括：

1）分别制备螺旋霉素半抗原、链霉素半抗原、庆大霉素半抗原、新霉素半抗原；

2）分别将螺旋霉素半抗原、链霉素半抗原、庆大霉素半抗原、新霉素半抗原与载体蛋白偶联，制备得到螺旋霉素半抗原-载体蛋白偶联物、链霉素半抗原-载体蛋白偶联物、庆大霉素半抗原-载体蛋白偶联物、新霉素半抗原-载体蛋白偶联物；