[发明专利]一种检测大观霉素的试纸条及方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测大观霉素的试纸条及方法，特别是检测牛奶中大观霉素的试纸条及方法。 

背景技术

大观霉素又称壮观霉素、奇放线菌素、壮观菌素等，为大观链霉菌所产生的一种氨基环醇类抗生素，对革兰氏阴性菌(如布鲁氏菌、克雷伯菌属、变形杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌等)有较强作用，对革兰氏阳性菌(链球菌、葡萄球菌等)作用较弱，对支原体亦有一定作用，是一新型特效专治淋病的抗生素，对淋病奈瑟菌有较强的抗菌作用。 

能促进动物生长，是良好的动物饲料添加剂，作为兽药广泛应用于畜牧业中。一些不法商贩受经济利益的驱使滥用抗生素，使大量抗生素残留在畜产品中，如果长期食用含有抗生素残留的动物源性食品，也就相当于长期低剂量吸收抗生素，使人体内菌株产生抗生素抗性，给患病时使用抗生素治疗带来不良影响，会破坏机体内环境平衡，造成菌群失调，抗生素过敏体质的人会出现过敏反应，引起免疫性溶血，同时造成食品和环境中药物残留污染的一系列问题。 

因此，各国政府和国际组织对动物性食品抗生素残留污染十分重视，已成为涉及人类健康的公共卫生热点问题。建立牛、羊奶及制品中大观霉素的残留检测方法对食品安全、进出口贸易等方面都有重要意义。 

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测大观霉素的试纸条。 

本发明所提供的试纸条包括微孔条、微孔试剂、微孔塞和试纸，试纸包括底板、样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜，其依次连接；所述微孔试剂为冻干的大观霉素特异性抗体-胶体金标记物；大观霉素特异性抗体可为大观霉素单克隆抗体或大观霉素多克隆抗体；反应膜上包被有一条检测线印迹和一条质控线印迹；当大观霉素特异性抗体为大观霉素单克隆抗体时，微孔试剂中包含大观霉素单克隆抗体-胶体金标记物，检测线包被有大观霉素-载体蛋白偶联物，质控线包被抗抗体；当大观霉素特异性抗体为大观霉素多克隆抗体时，微孔试剂中包含大观霉素多克隆抗体-胶体金标记物，检测线包被大观霉素-载体蛋白偶联物，质控线包被抗抗体；大观霉素半抗原是通过大观霉素与羧甲基羟胺反应，大观霉素与羧甲基羟胺的缩合物。缩合物分子结构如式Ⅰ： 

所述保护膜粘贴在样品吸收垫上的检测端，上面有MAX标记线。 

所述的检测线靠近样品吸收垫一端，质控线靠近吸水垫一端。检测线用检测线（T）表示，质控线用质控线（C）表示。以试纸的样品吸收垫一端为始端，以试纸的吸水垫一端为末端，质控线（C）距离反应膜与吸水垫始端相连的一端为5-8mm，检测线（T）距离质控线（C）4-6mm。 

所述大观霉素半抗原-载体蛋白偶联物是由式Ⅰ化合物的大观霉素半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。 

所述大观霉素特异性抗体-胶体金标记物中的大观霉素特异性抗体是以大观霉素-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得。 

所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；吸水垫为吸水纸；反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；吸水垫为吸水纸；保护膜为PE材质保护膜。 

本发明的另一个目的是提供了一种制备上述试纸条的方法，其包括步骤： 

1）在微孔条上制备冻干的大观霉素特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂，并用微孔塞盖在微孔条上； 

2）制备具有包被大观霉素-载体蛋白偶联物的检测线和包被抗抗体的质控线的反应膜； 

3）将2)制备好的反应膜与样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板组装成试纸； 

4）将1）和3）制备好的冻干有大观霉素特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂、试纸、微孔条以及微孔塞组装成试纸条。 

具体的说，步骤包括： 

1、大观霉素抗原合成及其抗体制备 

1）取大观霉素0.66 g、羧甲基羟胺0.27 g和吡啶1 ml于20 ml DMSO中的混合液，在室温下搅拌反应20小时，蒸除溶剂，柱层析纯化后在乙醇-水体系中重结晶得到大观霉素与羧甲基羟胺的缩合物。 

2）将大观霉素半抗原与载体蛋白偶联，形成大观霉素半抗原-载体蛋白偶联物； 

3）用大观霉素半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到分泌大观霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株或用大观霉素半抗原-载体蛋白免疫兔，得到大观霉素多克隆抗体； 

4）提取小鼠IgG或兔IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠IgG抗体或羊抗兔抗抗体； 

2、用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；