[发明专利]抗人CD133单克隆抗体及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种单克隆抗体，具体涉及抗人CD133单克隆抗体及其制备方法，以及所述单克隆抗体在人单核细胞白血病细胞系SHI-1的体外增殖中的应用。

背景技术

已知有许多受体-配体相互作用都参与诱导、建立和调节抗原特异性免疫反应。为了有效地激活T细胞反应，通常至少需要两个信号。其中除T细胞抗原受体（TCR）识别抗原提呈细胞（APC）上的MHC-抗原复合物以提供第一信号即抗原特异性信号外，还必须获得T细胞与APC表达的共刺激分子相互作用后产生的非抗原特异性、非MHC限制性的第二信号。第二信号即为共刺激信号或协同刺激信号。如果仅有抗原特异性信号而缺失共刺激信号，T细胞将表现为无反应或免疫耐受状态，甚至导致凋亡。可见，共刺激信号是T细胞克隆扩增、分化和发挥生物效应所必不可少的。因此可以认为，第一信号决定了T细胞活化的特异性，而第二信号则决定T细胞介导的免疫应答能否有效进行（Noelle RJ, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:6550, 1992; Allen RC et al., Science. 259:990,1993）。

近年来，分子生物学技术广泛应用于免疫学研究，共刺激分子被不断发现。根据其结构，这些共刺激分子可分为两类：一类是肿瘤坏死因子／肿瘤坏死因子受体（TNF/TNFR）超家族，包括CD40/CD154、CD27/CD27L、CD30/CD30L、4-1BB/4-1BBL和Fas/FasL等。另一类是免疫球蛋白超家族，如B7-CD28/CTLA4、LAF1-ICAM-1/ICAM-2/ICAM-3、ICOS-GL50、CD2/LFA-3等（Korthauer U et al., Nature, 361:539, 1993）。这些共刺激分子以受体和配体相互作用的方式传导信号。受体和配体一般表达在不同的细胞表面，通常一个为持续性表达，一个是诱导性表达。在免疫应答的不同阶段，这些分子以各自独特而又相关联的方式参与信号传导，共同调控机体的免疫应答。

人CD133(prominin-1)是一种局限性分布于胞浆膜的突出处，如上皮微绒毛、附睾导管上皮的硬纤毛处的糖蛋白，因此根据拉丁文 prominere,  取名为 prominin. 1997 年，Yin 等首次报道了一个新的造血干/祖细胞（HSPC）表面抗原 AC133 并制备了该抗原的单克隆抗体，2000 年 6 月由国际白细胞分化抗原工作组会议（ILDAW）命名为CD133。CD133 分子在蛋白结构上不同于4次跨膜（4-TM）和7 次跨膜（7-TM）受体家族成员，它是 5 次跨膜（5-TM）受体家族中的第一个成员，分子量约为120kDa，其分子转录由5个不同的启动子控制。CD133分子具有胞外的氨基末端和胞内的羧基末端，以及胞外的8个一样的N-糖基化位点。CD133的分子结构和蛋白表达的特点提示它可能是作为生长因子受体发挥生物学作用。此外，有12个不同氨基酸序列的prominin-1剪接体相继在啮齿类和灵长类被发现。

CD133 分子在干/祖细胞表达并随细胞分化快速下调，该特点使之成为内皮、脑、骨髓、肝脏、肾脏、前列腺、胰腺和包皮等组织检测和分离干/祖细胞的标记分子。此外，除了在正常组织表达外，在白血病细胞、脑胶质瘤、结肠癌、前列腺癌、肝癌和胰腺癌中也能检测到 CD133 分子的表达。已有的研究结果表明CD133+肿瘤细胞具有很强的自我更新、增殖能力强和多向分化的潜能，提示CD133是研究肿瘤干细胞的重要靶分子之一。同时还有研究显示 CD133 分子可能在肿瘤免疫逃逸、药物耐受以及放疗抵抗中发挥了重要作用。人 CD133 有 2 种亚型，继Yin 克隆并鉴定了CD133-1后Yu 等克隆出CD133-2，并发现与CD133-1 仅在胎脑和骨骼肌中呈优势表达特性不同，CD133-2 在许多胎儿组织和成熟组织中呈优势性表达，并在一些肺癌、前列腺癌、结肠癌和乳腺癌细胞株中也有表达。两种异构体的表达谱不同，它们的功能是否有差异目前尚不清楚。