[发明专利]用于治疗肝癌的基因药物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及肝癌治疗领域，特别地，涉及一种用于治疗肝癌的基因药物，本发明的另一方面还提供了一种上述基因药物的制备方法和应用。

背景技术

肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）是全球男性第五大恶性肿瘤，死亡率高居恶性肿瘤第二位，每年新发病例数与死亡人数几乎接近1：1，而中国HCC的每年新发病例数约占全球的一半，严重危害着我国人民的生命健康。截止目前，肝切除技术已有显著的进步，手术切除率显著增加，术后并发症与死亡率也显著降低，肝癌治疗方案基本确立为以外科手术治疗为核心的综合治疗。然而，以术后5年生存率为标志的长期生存率仍无根本性改善。究其原因，主要是由于肝癌细胞的高度侵袭性和手术后的高复发转移率所致，尤其对于晚期HCC和出现复发转移的患者缺少有效的临床治疗手段。这是影响肝癌患者术后长期生存的主要障碍。因此，研发抗肝癌复发转移药物具有十分重要的理论和现实意义。

目前，可用于治疗肝癌的药物主要有传统化疗药物和靶向药物。常用化疗药物主要有5-氟脲嘧啶、阿霉素、表阿霉素、丝裂霉素、顺铂、卡铂等。前述化疗药物的有效率均在10%～20%，治疗效果不令人满意，且特异性差，副作用大。虽然随后还有新的、对肿瘤细胞杀伤力强的药物上市，但是从治疗效果，改变患者的手术后癌细胞的复发和转移，延长生命等综合效果来说并不理想。靶向药物是近年来研究肝癌的热点，也涌现了一批像索拉菲尼等有价值的药物。这些靶向药物存在一个共同问题，在于作用的有效性及对患者生存时间的延长；但是效果并不理想，其中最为成功的索拉菲尼药物对患者生存时间的延长也仅为3个月。因此，迫切需要我们研制能有效抑制肝癌细胞生长，复发和侵袭转移的的新型药物。

发明内容

本发明目的在于提供一种用于治疗肝癌的基因药物，以解决现有治疗肝癌的药物不能有效抑制肝癌细胞生长，复发和侵袭转移的技术问题。

为实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种用于治疗肝癌的基因药物，包括治疗有效量的核苷酸序列和辅料；有效量的核苷酸序列为具有SEQ No.1的核苷酸序列。

进一步包括将核苷酸序列负载的载体，载体为聚乙烯亚胺。

进一步地，聚乙烯亚胺为糖基化聚乙烯亚胺；糖基化聚乙烯亚胺的氮/磷比为6~48。

进一步地，糖基化聚乙烯亚胺的氮/磷比为24。

根据本发明的另一方面，还提供了前述基因药物的制备方法，包括以下步骤：

1）将腺嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸、胸嘧啶核苷酸、胞嘧啶核苷酸和尿嘧啶核苷酸进行体外合成步骤得到miR-140模拟物；

2）将miR-140模拟物与辅料混合得到基因药物。

进一步地，前述基因药物的制备方法，还包括以下步骤：

1）按照权利要求5的方法制备miR-140模拟物，将miR-140模拟物用无RNA酶的水稀释成miR-140模拟物溶液；

2）将聚乙烯亚胺聚合物溶于氯化钠溶液中制备浓度为0.01~0.1mol/L的聚乙烯亚胺溶液；

3）将聚乙烯亚胺溶液对miR-140模拟物溶液进行包裹步骤得到装载有miR-140基因的聚乙烯亚胺载体；

4）将聚乙烯亚胺载体与辅料混合得到基因药物。

进一步地，前述基因药物的制备方法，还包括以下步骤：

1）按照权利要求5的方法制备miR-140模拟物，将miR-140模拟物用无RNA酶的水稀释成miR-140模拟物溶液；

2）将2重量份的支链淀粉、1重量份的羰基二咪唑溶于无水二甲基亚砜中静置4小时得到第一物质；将2重量份聚乙烯亚胺加入到第一物质中混匀后放置1天得到第二物质；将第二物质进行透析步骤3天得到糖基化聚乙烯亚胺聚合物；将糖基化聚乙烯亚胺聚合物溶于氯化钠溶液中制备浓度为0.01~0.1mol/L的糖基化聚乙烯亚胺溶液；

3）将糖基化聚乙烯亚胺溶液对miR-140模拟物溶液进行包裹步骤得到装载有miR-140基因的糖基化聚乙烯亚胺载体。

4）将糖基化聚乙烯亚胺载体与辅料混合得到基因药物。

进一步地，体外合成步骤为：

1）用三氯乙酸脱去核苷酸中的二甲氧基三苯甲基保护基团得到具有游离的5’羟基的核苷酸；

2）将具有亚磷酰胺保护的核苷酸单体与四氮唑活化剂混合并合成亚磷酰胺四氮唑活性中间体；

3）将亚磷酰胺四氮唑活性中间体与具有游离的5’羟基的核苷酸进行缩合反应得到寡核苷酸链；