[发明专利]一种检测青光眼易感基因的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种检测青光眼易感基因的试剂盒，通过同时检测与青光眼关联的基因LOXL1和CAV1/CAV2的单核苷酸多态性位点基因型来评估个体罹患青光眼风险性。

背景技术

青光眼是世界上第三位的致盲眼病，典型的临床表现是视神经萎缩、进行性视野缺损和眼压增高。尽管确切的发病机制尚不为人们所知，但根据原发性青光眼发病呈现家族性，青光眼亲属中的高发性及双生子的研究，均表明遗传因素在青光眼的发病中起着重要作用。随着分子遗传学和分子生物学在眼科领域内研究及应用的不断深入，青光眼的研究有了飞速的发展和长足的进步。

青光眼具有遗传性，代表青光眼有一定的遗传病因。家族中有过青光眼病史的患者需要定期往医院检查，早期发现并及时的治疗为治愈青光眼的关键。

青光眼是一种会影响光学神经，而且导致失明的疾病。研究职员检查了青光眼病人的271位兄弟姊妹并且发现，大约12%的人患有青光眼;那些最初筛检结果没有罹患青光眼又再被筛检的人中(159个人)，7%的人在之后6到8年的追踪研究期间发展了青光眼，而19%的人被怀疑患有青光眼。这些数据显示青光眼会在家庭中遗传，而且风险随着年龄增加而增加。

青光眼具有遗传性，根据英国一项新近研究显示，假如你有兄弟姊妹患有青光眼，那么你眼睛发生损害的风险可能是一般人预期风险的4倍。基于这些调查结果，有青光眼病人的兄弟姊妹最好每两年要做一次眼睛检查。

目前，LOXL1和CAV1/CAV2基因已被科学家证实与青光眼疾病的发生相关。

研究人员调查了多个国家逾4万人的健康数据，在代号7Q31的染色体上发现了这个遗传标记。它是一个单核苷酸的变体，是比基因更小的遗传单位，其位置在已知的两个与青光眼有关的基因CAV1和CAV2附近。

分析显示，约6%的欧洲人携有一对该遗传标记，他们患青光眼的风险比其他欧洲人高出60%。与欧洲人相比，中国人携带这个遗传标记的比例非常低，基因组中存在这个标记的人还不到1%。不过，携带该遗传标记的中国人患青光眼的风险要大得多――比其他中国人高出5倍以上。

LOXL1是科研人员通过对大规模的基因组进行分析，最终发现在人体第15号染色体上的LOXL1基因与青光眼密切相关。所有的剥脱性青光眼病例都可归因于这一基因的变异。研究小组总共选取了1．6万名青光眼患者进行研究。统计分析显示，携带变异基因的人患剥脱性青光眼的风险大大高于正常人。

研究小组进一步分析发现，LOXL1基因编码的蛋白质与弹性纤维的形成有关，而弹性纤维如果在眼部异常积聚，就会诱发剥脱性青光眼。

发明内容

基于LOXL1基因、CAV1/CAV2基因上的2个SNPs位点多态性可用来评估个体罹患青光眼风险性的基础上，本发明提供一种检测青光眼易感基因的试剂盒。

试剂盒包括：

检测LOXL1基因上rs3825942号SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对；

检测CAV1/CAV2基因上rs4236601号SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对；

荧光定量PCR反应组件（包括Taq酶、dNTP混合液、MgCl₂溶液、反应缓冲液、去离子水等）。

本试剂盒中所述的特异性引物对是指针对LOXL1基因上rs3825942号SNP位点和CAV1/CAV2基因上rs4236601号SNP位点而设计，能特异性扩增出包含这2个SNPs位点的DNA片段的引物对。设计这类引物对是本领域技术人员能够轻易完成的。优选地，试剂盒中包含具有SEQ ID NO：1和2、3和4所示序列的引物对。特异性引物对可用常规的合成技术进行合成。本领域的技术人员能够理解，本发明的引物不限于这两对引物。

本试剂盒中所述的特异性荧光探针对是指针对LOXL1基因上rs3825942号SNP位点和CAV1/CAV2基因上rs4236601号SNP位点而设计，能通过荧光定量PCR技术特异性检测出这两个SNPs位点基因型的Taqman探针对。设计这类探针是本领域技术人员能够轻易完成的。优选地，试剂盒中包含具有SEQ ID NO：5和6、7和8所示序列的Taqman探针对。特异性荧光探针对可用常规的探针合成技术进行合成。本领域的技术人员能够理解，本发明的特异性荧光Taqman探针对不限于这两对探针，所有可用于荧光定量PCR法检测本发明中所述用来评估个体罹患青光眼风险性的两个SNPs位点的探针均在本发明范围内。

本发明试剂盒的组分和含量包括：