[发明专利]一种与胰腺癌相关的血清/血浆miRNA标志物及其应用

说明书

发明领域

本发明属于基因工程及肿瘤学领域，涉及一种与胰腺癌相关的血清/血浆miRNA标志物及其应用。

背景技术

胰腺癌是常见的消化道肿瘤之一，据估计，全球2008年新发胰腺癌病例达27万。在我国，近20年来胰腺癌发病率增长了将近6倍，特别是在经济较发达的地区，胰腺癌的发病率已与西方国家持平。胰腺癌恶性程度高，预后极差，由于其特殊的生物学行为，即易于侵犯血管和神经，肿瘤很小时就发生远处转移，对常规化疗、放疗和免疫治疗等均不敏感等，我国的5年生存率仅为5％左右。近年来，随着胰腺癌发病率和死亡率的继续增高，胰腺癌已严重威胁着人类的健康和生命。

尽管胰腺癌高度恶性，但是如果能早期发现早期治疗，仍可获得最佳治疗效果，如早期胰腺癌手术切除率为90%-100%，5年生存率可达70%-100%，与进展期胰腺癌相比，两者治疗效果存在着巨大的反差。可是，由于胰腺解剖位置深在及胰腺癌的生物学特性，导致了胰腺癌早期诊断困难，大部分患者就诊时已处于晚期。目前对胰腺癌的生物学标志进行了大量而广泛的研究，包括基因标记、血清学标记和细胞学标记等，由于这些指标的特异性和敏感性各有差异，对于早期胰腺癌目前还没有准确有效的筛查方法，也缺乏可靠的诊断措施，鉴于此，胰腺癌早期诊断率亟待提高，寻找有效的标志物对胰腺癌早期诊断、促进其预后具有重要意义。

MicroRNAs（即miRNAs）是近年来肿瘤分子生物学研究领域的一个热点，它的成熟状态是一类长约19-23个核苷酸的小单链RNA分子，进化上具有高度保守性。它广泛存在于真核生物中，是一组不编码蛋白质的短序列RNA，其本身不具有开放阅读框（ORF）。miRNA具有高度的保守性、时序性和组织特异性，通过与靶mRNA的3′端非编码区结合，降解或者抑制mRNA的翻译导致靶基因的转录后沉默，从而调节生物体内在的与机体生长、发育、疾病发生过程有关的基因的表达。自从参与调控线虫时序发育的lin-4与let-7被发现以来，miRNA分别在2002年和2003年两度入选Science杂志年度十大科技突破。2005年预测miRNAs至少能调控5300个人类基因，即所有基因的30%。随着研究的深入，越来越多的miRNAs不断被发现。聚光灯下的miRNA已经逐步摆脱了DNA光芒的掩盖，从“配角”变成“主角”，并且对DNA的中心地位提出了新的挑战。近年来，miRNA与肿瘤的关系已经成为研究的热点和重点，已经发现miRNA通过负调控基因的表达与肺癌，乳腺癌，胃癌，胰腺癌等的发病高度相关。

研究已经证实血清/血浆中存在几百种的miRNAs，这些小分子RNAs性质稳定、含量丰富、易于定量检测，且存在显著的疾病特异性。血清/血浆miRNA作为肿瘤诊断和预后分子标志物不仅具有创伤小，方法准确、便捷的优势，而且还可改进疾病诊断、肿瘤分类、预后估计、疗效及复发预测的精度。但是，由于血清/血浆中miRNA的表达量较低，寻找一种灵敏度高、操作简便且成本低廉的检测方法是目前血清/血浆miRNA在肿瘤临床检测中亟待解决的问题。另一方面，仅仅采用一种血清/血浆miRNA作为肿瘤标志物往往特异性不足，若将多种miRNA组合使用并与其他类型肿瘤标志物检测相结合，可有望显著提高诊断的准确性。

然而，目前还没有用于胰腺癌诊断的较为稳定的生物标志物的报道，若能筛选出胰腺癌异常表达的血清/血浆miRNAs作为生物标志物，并研制相应的诊断试剂盒，对我国胰腺癌的诊断现状必将是一次有力的推动。

发明内容

本发明的首要目的是针对上述技术问题，提出一种与胰腺癌相关的血清/血浆miRNA标志物。

本发明的第二个目的是提供上述血清/血浆miRNA标志物的引物。

本发明的第三个目的是提供上述血清/血浆miRNA标志物及其引物在制备胰腺癌辅助诊断试剂盒中的应用。

本发明第四个目的是提供胰腺癌辅助诊断的试剂盒。

发明人通过分离和研究胰腺癌患者及与其年龄、性别匹配的健康对照血清/血浆中miRNAs，寻找一组与胰腺癌高度相关的高特异性和敏感性的miRNAs，并研制出可便于临床应用的胰腺癌诊断试剂盒，为胰腺癌的筛查和诊断提供数据支持，为发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物提供数据支持。

本发明的目的是通过下列技术方案实现的：

一种与胰腺癌相关的血清/血浆miRNA标志物，该标志物为miR-451和miR-409-3p的组合。

所述的血清/血浆miRNA标志物的引物，这些引物为：