[发明专利]一种蓝萼甲素的纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物化学领域，特别涉及一种蓝萼甲素的纯化方法。 

背景技术

蓝萼甲素（glaucocalyxin A）为贝壳杉烯型的二萜类化合物，CAS号：79498-31-0，分子式C₂₀H₂₈O₄，分子量332.43，分子结构： 

。

蓝萼香茶菜为唇形科香茶菜属植物，又叫香茶菜、山苏子、回菜花、倒根野苏。以全草入药，具有清热、除湿、解毒之功效，用于感冒、咽喉肿痛、扁桃体炎、胃炎、肝炎、乳腺炎、癌症（食道癌、贲门癌、肝癌、乳腺癌）。 

现在研究发现蓝萼香茶菜中含有大量二萜类成分，主要是蓝萼甲素成分，具有显著细胞毒活性。 

蓝萼甲素的纯化方法，一般采用有机试剂回流提取和硅胶柱分离相结合。如项昭保等人采用对蓝萼香茶菜80%乙醇提取物的乙酸乙酯部分进行色谱分离，分别为蓝萼甲素、蓝萼乙素等二萜类物质。再如专利（申请号201010264658.5）“一种蓝萼甲素的提取方法”，该方法蓝萼香茶菜地上部分并粉碎，在常压下用75～80%乙醇水溶液回流提取2～3次，每次回流提取2～3小时，浓缩提取液中加入硅胶并搅拌均匀，进行硅胶柱层析，无水乙醇重结晶，得蓝萼甲素晶体。如上所述，现有纯化蓝萼甲素的方法存在着纯化周期长、收率低而且方法繁琐。 

发明内容

本发明的目的是解决现有技术的不足和缺陷，提供一种蓝萼甲素的纯化方法，该方法高效、快速。 

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案： 

一种蓝萼甲素的纯化方法，其特征在于：以蓝萼香茶菜为原料，粉碎过20~80目筛投入萃取釜，通入液态CO₂和夹带剂进行超临界萃取，所得萃取物，采用高速逆流色谱法纯化，紫外检测器在线监测，收集目标成分，回收试剂，干燥即得。

所述的超临界CO₂萃取条件为：萃取温度为35~50℃、压力为25~30MPa、时间为2~4h，CO₂流量为20~25L/h，以乙酸乙酯为夹带剂，夹带剂用量为原料量的1~3倍量，解析温度50~60℃、压力5~10MPa。 

所述的高速逆流色谱法纯化为：取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水，按1~3:3~10:1~5:3~8混合，充分分层后，取上相注满高速逆流色谱管做固定相，开转主机，转速700~1000rpm，同时泵入下相做固定相，建立动态平衡后，流速调节为1~4ml/min，用流动相溶解萃取物，由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集目标成分。 

本发明的积极效果是：方法采用超临界CO₂萃取和高速逆流色谱纯化结合，是一种高效、快速、清洁无污染的纯化方法，解决了硅胶柱分离收率低、操作复杂的的技术缺陷，又克服了制备液相处理量小的技术不足，适合高纯度的蓝萼甲素的制备。 

具体实施方式：

实施例1：

萃取：蓝萼香茶菜全草粉碎，过60目筛，取500g投入萃取釜中，通入处于超临界状态的CO₂进行萃取，设定萃取釜参数：萃取温度35℃，压力为25MPa，通入CO₂流量为20L/h，待萃取罐内环境稳定后，通入乙酸乙酯作为夹带剂，流量500ml/h，萃取3h，设置分离釜的温度50℃、压力8MPa，解析得萃取物。

纯化：取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水，按1:3:2:3混合，充分分层后，取上相注入满高速逆流色谱管做固定相，开转主机，转速700rpm，同时泵入下相做固定相，建立动态平衡后，流速调节为2ml/min，用流动相溶解萃取物，由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集目标成分，连续制备，流分回收试剂，得3.5g，含量98.5%。 

实施例2： 

萃取：蓝萼香茶菜全草粉碎，过80目筛，取500g投入萃取釜中，通入处于超临界状态的CO₂进行萃取，设定萃取釜参数：萃取温度45℃，压力为30MPa，通入CO₂流量为25L/h，待萃取罐内环境稳定后，通入乙酸乙酯作为夹带剂，流量500ml/h，萃取2h，设置分离釜的温度60℃、压力10MPa，解析得萃取物。